猪猪也能打疫苗啦！科学家解锁戊型肝炎病毒防控新密码

研究背景

戊型肝炎病毒（HEV）是一种单股正链RNA病毒，属于 Orthohepevirus 属，是导致戊型肝炎的病原体。目前已知有五个HEV基因型，其中HEV-3和HEV-4基因型具有人畜共患特性，能够感染人类、猪以及其他动物宿主。HEV-3在全球范围内广泛分布，尤其在发达国家中，猪被认为是HEV-3的主要动物宿主之一，其感染在猪群中较为常见，并且可通过食物链等途径传播给人类，引发急性肝炎等疾病，对人类健康构成威胁。尽管如此，目前市场上尚无针对HEV-3的商业化动物疫苗。近年来，随着对HEV认识的不断深入以及公共卫生事件中病毒传播风险的关注，开发有效的HEV疫苗以阻断其在动物宿主中的传播，进而降低人类感染风险，成为了科研人员的研究重点之一。

研究方法

实验动物与分组：选取8只6周大的HEV阴性立陶宛白猪，随机分为免疫组和对照组，每组4只，各含2只雄性和2只雌性。其中免疫程序为：免疫组猪在第0天（D0）和第14天（D14）通过肌肉注射分别接受1ml浓度为200μg/ml的重组猪源HEV-3 ORF2衣壳蛋白（rORF2p）；对照组则在相同时间点接受等量的磷酸盐缓冲液（PBS）。 

样本采集：在D0、D14和D28时，从每只猪的颈静脉采集血液样本，用于后续检测。实验结束后，对所有动物进行安乐死并尸检，检查有无病变。 

抗体检测：从猪血样中制备血清，使用商业化的ID Screen戊型肝炎多物种间接ELISA试剂盒检测血清中HEV特异性IgG抗体，所有样本均进行三份检测，并以样本与阳性对照比值（S/P%）表示抗体水平。 

细胞流式细胞术与免疫细胞表型分析：采用密度梯度离心法从全血样本中分离外周血单个核细胞（PBMCs），调整细胞浓度后，立即使用荧光素标记的抗体进行染色，利用流式细胞仪分析并记录数据，通过专业软件进行数据处理，对免疫细胞进行表型分析，包括设置细胞活性和单细胞门，建立CD3和CD3细胞门，进一步确定T细胞亚群门，以及在CD3-和总细胞群中分别建立CD21和CD14+细胞门等。 

统计分析：运用GraphPad Prism 10.1.0软件进行统计分析，采用重复测量双因素方差分析后接未经校正的费舍尔最小显著差异检验，比较对照组和免疫组在各时间点的差异，以P值小于0.05作为具有统计学意义的判断标准。

研究结果
抗HEV IgG抗体反应：图表（图2A）展示了不同时间点（D14和D28）血清抗HEV IgG水平的显著差异。免疫组猪在D14和D28时的抗体水平显著高于对照组（P < 0.0001），且D28时抗体水平比D14时更高（P = 0.0005）。B细胞比例：图表（图2B）呈现了B细胞比例随时间点的变化趋势。免疫组猪的B细胞比例在D14和D28时均显著高于对照组（P < 0.001），且D28时B细胞比例进一步增加（P = 0.0016）。 

T细胞比例变化：揭示了T细胞在总检测细胞中的比例变化（图3）。免疫组猪在D14和D28时的T细胞比例显著高于对照组（P < 0.05），且D28时T细胞比例显著上升（P < 0.0001）。

结论与展望

本研究首次在猪体内测试了重组猪源HEV-3 ORF2衣壳蛋白（rORF2p）作为疫苗候选物的免疫反应潜力。结果表明，rORF2p能够显著诱导猪产生抗HEV IgG抗体反应，并且在免疫后能够增加B细胞、T细胞以及单核细胞/巨噬细胞的比例，显示出其激活猪适应性免疫反应的能力。这为将rORF2p作为开发针对HEV-3的猪用疫苗提供了有力的实验依据，也为进一步研究HEV的免疫机制和防控策略开辟了新的途径。

当前公共卫生领域对人畜共患病的高度关注以及食品安全问题的日益重视，开发有效的HEV疫苗不仅有助于保护动物健康，减少经济损失，还能从源头上降低人类感染HEV的风险，保障人类健康。因此，本研究的成果具有重要的科学意义和现实意义，有望推动HEV防控领域的进一步发展。

参考文献链接：

DOI：10.1016/J.VACCINE.2024.126561