无针守护牧场：滴鼻一次、冷藏七年，兽用腺病毒疫苗全场景落地

在非洲撒哈拉以南地区，新城疫（ND）一直是制约家禽业发展和粮食安全的重要瓶颈。本研究围绕一种基于人5型腺病毒载体的基因工程疫苗——Ad-CMV-F，成功实现了从实验室到动物验证的全链条突破，解决了传统疫苗依赖进口无特定病原体种蛋、生产周期长、成本高、冷链要求严苛等痛点。研究核心成果体现在三大维度：一是建立了可在非洲本土落地的低成本、高产量、无血清悬浮细胞培养工艺；二是开发出既耐热又耐长期冷藏的液体与冻干双剂型，显著降低冷链负担；三是首次证明“滴鼻一次＋加强一次”即可使雏鸡获得100%攻毒保护，且最低有效剂量仅需5×10⁸ TCID₅₀，为“无针化”田间免疫提供了范例。

 在上游生产环节，团队选用已适应无血清培养的HEK293SF细胞，在1L与3L搅拌式生物反应器中采用批式及补料批式策略，通过优化感染时机与感染量（MOI 0.35–3.5），使病毒 infectious titer 峰值达到5.1×10⁹ TCID₅₀/mL，折合约10¹² infectious viral particles per liter，产能处于文献报道的高端区间，且全程无需动物源成分，摆脱了传统鸡胚路线对进口种蛋的依赖。更关键的是，下游纯化摒弃了常规超高速离心或层析，仅用“化学裂解＋Benzonase降解DNA＋深层过滤＋300 kDa切向流超滤”四步，即可在4小时内获得无菌、低DNA（<0.4 µg/mL）、低宿主蛋白（≈20 µg/mL）的浓缩原液，回收率接近100%，且易于在现有兽医GMP车间放大复制，大幅削减设备投入与能耗。

图1 Ad-CMV-F 腺病毒载体的下游纯化或澄清工艺 

稳定性数据尤为亮眼。研究团队设计了五种液体配方与三种冻干配方，经过37 °C、室温（21.5 °C）、4 °C与–80 °C多温度矩阵、最长24周的苛刻考察，发现含2%蔗糖＋0.005%泊洛沙姆188的L2液体制剂表现最优：37 °C下1周活性损失仅12.8%，推算半衰期14天；室温存放16周或4 °C存放24周，滴度下降均<0.1 log，相当于7.9年理论半衰期，足以覆盖非洲多数地区的冷链波动。冻干方面，以5%甘露醇＋5%蔗糖为骨架的S1配方残水3–5%，外观饱满，复溶后滴度损失<0.11 log，且4 °C储存24周无显著下降，为极端无冷链场景提供了备选方案。

免疫保护试验直接回答“够不够好用”的问题。一日龄雏鸡分为10组，比较肌肉、皮下与滴鼻三种接种途径，剂量自1×10⁹至5×10⁷ TCID₅₀不等，21天后以0.5×10⁶·⁵ ELD₅₀的致死剂量攻毒，观察14天。结果肌肉/皮下组全部获得100%保护，符合预期；而滴鼻组在“5×10⁸ TCID₅₀·两剂”方案下同样实现100%保护，且无临床症状、无组织病变，最低剂量5×10⁷ TCID₅₀仍能提供70%存活，显著优于传统I2株活疫苗对照。值得注意的是，即便使用“过滤澄清＋超滤”工艺得到的粗纯制剂，滴鼻剂量5×10⁸ TCID₅₀依旧达到100%保护，证明田间可跳过昂贵精纯步骤，直接以浓缩原液配发，进一步压缩成本。

综合来看，该研究首次将“高滴度无血清生产＋低成本过滤纯化＋耐热液体剂型＋滴鼻一次100%保护”四大要素集成于同一款新城疫腺病毒疫苗，并给出明确且可复制的工艺参数与质量指标。对非洲及其他资源受限地区而言，这意味着可在本土工厂于一周内完成从细胞接种到成品分装，疫苗在普通冰箱甚至短暂室温运输中仍保持效力，而养殖户只需用塑料滴管在雏鸡鼻孔滴两滴即可实现终身保护，彻底摆脱“冷链＋针头＋专业兽医”的束缚。该平台的腺病毒骨架同样适用于未来插入其他禽类病原抗原，具备向“多联鼻滴疫苗”拓展的巨大潜力。。

参考来源：10.3390/vaccines12010041