猫杯状病毒（FCV）是导致猫呼吸道疾病、口腔溃疡的主要病原体，近年来更演化出强毒力全身性毒株（VS-FCV），引发脱毛、皮肤坏死、多器官损伤等严重症状，死亡率显著升高。由于该病毒突变率高、基因型多样，现有疫苗难以提供完全保护，给全球伴侣猫健康带来严峻挑战。

近日，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所团队在《Journal of Virology》发表重要研究成果，成功研发出一种新型复制缺陷型FCV疫苗（rHBDL2 FCV-△VP2），该疫苗不仅安全性优异，还能诱导广谱中和抗体，为猫杯状病毒病的精准防控提供了全新方案。

图 1 rHBDL2 FCV-△VP2的构建与特性表征

研究团队采用反向遗传学技术，通过靶向缺失FCV VP2基因N端19-48位核苷酸，构建了复制缺陷型重组病毒。该疫苗仅能在稳定表达VP2蛋白的F81-VP2细胞中高效复制，病毒滴度可达10⁹.⁴³ TCID₅₀/mL，而在普通猫肾细胞（F81）中无法完成基因组复制，仅能进行单轮感染并表达抗原，既保留了活疫苗的高免疫原性，又具备灭活疫苗的安全性。透射电镜观察显示，重组病毒粒子形态与野生型FCV一致，表明VP2基因缺失不影响病毒颗粒组装。

在安全性评估中，不同剂量（10⁵-10⁸ TCID₅₀/mL）疫苗免疫2月龄猫后，所有试验猫均未出现不良反应，体重正常增长。免疫后剖检结果显示，疫苗未侵入心、肝、肺、肾等主要器官，组织病理学检查无异常，证实该疫苗对猫具有良好的安全性。

图 2 rHBDL2FCV-△VP2诱导高水平中和抗体

免疫原性试验结果显示，疫苗免疫后能快速诱导猫产生高水平中和抗体。首免后21天，10⁷-10⁸ TCID₅₀/mL剂量组血清阳转率达100%，加强免疫后中和抗体效价进一步升高至1:27.8-1:29.4。攻毒保护试验中，免疫猫均未出现明显临床症状，仅低剂量组少数猫表现轻微不适；而未免疫对照组80%出现典型FCV感染症状，包括口腔溃疡、呼吸道症状及体重下降。免疫组猫血液中未检测到病毒载量，眼鼻分泌物病毒排毒持续时间显著缩短，肺部、气管等组织的病毒载量远低于对照组，组织病理学损伤轻微，表明疫苗能有效阻止病毒复制与扩散。

图 3 rHBDL2QD2VP1FCV-△VP2的构建与鉴定

为解决FCV基因型多样导致的交叉保护不足问题，研究团队将疫苗的VP1基因替换为遗传距离较远的QD2毒株VP1基因，构建了重组疫苗rHBDL2QD2 VP1 FCV-△VP2。联合免疫两种疫苗后，猫血清对GI、GII基因型FCV均表现出强效交叉中和活性，涵盖强毒力全身性毒株、呼吸道毒株、疫苗株及弱毒株等多种类型，显著拓宽了疫苗的保护谱。

图 4 rHBDL2FCV-△VP2mCherry FCV病毒载体构建及稳健性表达验证

值得关注的是，该复制缺陷型病毒还具备作为病毒载体的潜力。研究团队在VP2基因缺失位点插入mCherry红色荧光基因后，成功构建重组病毒rHBDL2 FCV-△VP2mCherry，该病毒在细胞中稳定传代至20代仍能持续表达外源基因，为开发多价疫苗（如同时防控FCV与猫疱疹病毒等）奠定了基础。

目前，传统FCV疫苗主要为减毒活疫苗和灭活疫苗，存在安全性隐患或免疫效果不佳等问题。新型复制缺陷疫苗通过基因工程改造，实现了安全性与免疫原性的完美平衡，且具备广谱保护和载体开发潜力，有望替代传统疫苗成为猫杯状病毒病防控的新一代工具。未来，研究团队将进一步开展田间试验，优化疫苗配方与接种程序，推动其产业化应用，为全球伴侣猫健康保驾护航。

原文链接：https://doi.org/10.1128/jvi.00093-25