双剑合璧！牛支原体嵌合蛋白横空出世，为疫苗研发与精准诊断破局

研究背景

Mycoplasma bovis是全球牛群的重要病原体，可引发呼吸道疾病、乳腺炎、关节炎等多种病症，造成巨大养殖经济损失。该病原体存在抗原变异性强、耐药性加剧、胞内生存能力等特点，现有疫苗efficacy有限，诊断方法缺乏标准化，导致疾病防控难度极大，亟需开发高效、特异的抗原相关防控与诊断工具。

关键突破

精准筛选表位，成功构建双嵌合蛋白

研究团队利用PsortB、TopCons、BepiPred等多种生物信息学工具，分析Mycoplasma bovis非冗余蛋白质组，筛选出28个专属B细胞表位和32个T细胞表位，通过EAAAK和GGGGGG惰性连接子串联，构建出含296个氨基酸的PQ1Mb和281个氨基酸的PQ2Mb两种嵌合蛋白，明确了其三维结构与抗原性（图1）。

图1 Mycoplasma bovis嵌合蛋白结构示意图

高效表达纯化，验证蛋白抗原活性

将嵌合蛋白编码序列克隆至pET-28a(+)载体，分别在E.coli BL21 Tuner (DE3)和E.coliBL21 (DE3)中成功表达，两种蛋白均表现出良好可溶性，经镍螯合树脂纯化后，产量分别达约400μg/L和200μg/L。Dotblot实验证实，重组蛋白可与Mycoplasma bovis感染兔血清特异性结合，抗原性显著（图2）。

图2 重组蛋白SDS-PAGE电泳与Westernblot验证图

牛体免疫试验，证实强免疫原性

以Gir品种牛为研究对象，经两次免疫含嵌合蛋白与Montanide ISA 61 VG佐剂的制剂后，通过ELISA和Western blot检测发现，免疫后15天即可诱导抗体产生，45天达峰值并稳定维持，抗体亲和力检测显示，解离50%抗体需2.5-5.4M硫氰酸铵，且无不良反应（图3）。

图3 牛体液免疫应答与抗体亲和力评估图

结论与展望

本研究创新性地通过多表位串联策略构建两种Mycoplasma bovis嵌合蛋白，兼具高特异性和良好免疫原性，既解决了传统抗原特异性不足的问题，又为规模化生产提供了可能，为新型疫苗研发和免疫诊断试剂优化奠定了坚实基础。

但仍需开展大规模多群体验证，明确其对不同菌株的交叉反应性；后续还需通过攻毒试验验证保护效力，优化蛋白结构与免疫方案，同时推进产业化转化，有望为全球Mycoplasma bovis相关疾病的防控提供高效解决方案，助力畜牧业健康发展。

参考文献

Gomes C P, Silva L S C d, Guimarães B C d B, et al. Construction and immunological characterization of two chimeric proteins built from the Mycoplasma bovis genome. Veterinary Microbiology 312 (2026) 110793.