一、研究背景

马立克氏病（MD）是由 Ⅰ 型马立克氏病病毒（MDV-1）引起的鸡高度接触传染性、致死性淋巴肿瘤性疾病，每年给全球养禽业造成超 10 亿美元经济损失。目前疫苗免疫是防控该病的主要手段，但野毒持续变异导致免疫失败频发，且临床无法快速区分野毒感染与疫苗病毒，给疫病精准防控带来巨大挑战。

近期，河南省农业科学院团队在国际期刊《Viruses》发表重要研究成果：成功建立一种多重 PCR（mPCR）检测方法，仅通过一次 PCR 反应，就能同时鉴别马立克氏病 3 个血清型病毒，精准区分野毒感染与疫苗免疫，为临床快速诊断、流行病学监测及疫苗效果评价提供了全新技术支撑。

二、技术突破：单管反应区分 4 种病毒片段

研究团队针对马立克氏病病毒的基因特征，选择MDV-1 的 meq 基因、MDV-2（SB-1 株）和 HVT 的 gB 基因为靶标，设计 5 条特异性引物，在同一 PCR 体系中实现 4 种目的片段的特异性扩增：

1.MDV-1 野毒 / 疫苗毒：扩增出1020 bp（S-meq） 或 1197 bp（L-meq） 条带；

2.MDV-2 疫苗株（SB-1）：扩增出789 bp 条带；

3.HVT 疫苗株（FC-126）：扩增出483 bp 条带。

通过大量引物筛选与体系优化，最终确定的最佳引物组合为：meq-2F/2R + SB-1-1F/1R + HVT-8R，可实现特异性强、条带清晰、无干扰的多重扩增。

三、性能优越：高特异、高灵敏、高准确

该方法经过严格验证，展现出三大突出优势：

特异性极强对 MDV-1、MDV-2、HVT 特异性扩增，对禽白血病病毒（ALV）、网状内皮增生症病毒（REV）、禽腺病毒 4 型（FAdV-4）均无交叉扩增，不出现假阳性。

图1 Multiplex PCR 特异性与最优引物组合鉴定

灵敏度高最低检测限达10³ 拷贝 /μL，可检出临床样品中低载量病毒，满足早期感染检测需求。

临床符合率高对 522 份临床疑似病鸡肝脏、脾脏样本检测显示，MDV-1 野毒总阳性率为60.5%，疫苗株 SB-1 阳性率达55.9%；与常规单重 PCR 对比检测 100 份样本，总符合率近100%。

四、临床价值：破解免疫鉴别难题，助力精准防控

当前，我国养鸡场广泛使用CVI988、SB-1、HVT等单 / 二联疫苗，但病毒持续进化出现超强毒（vv+MDV）和超高毒力变异株（HV-MDV），常突破现有疫苗保护，导致免疫鸡群仍暴发肿瘤。

图2 Multiplex PCR 对临床样本的检测结果

传统检测无法区分 “疫苗阳性” 还是 “野毒感染”，常造成误判。而该多重 PCR 方法可直接明确：

1.仅出现疫苗条带：免疫正常；

2.仅出现野毒条带：野毒感染；

3.同时出现野毒 + 疫苗条带：免疫失败 / 混合感染。

研究对 30 个养殖场的检测发现，86.7% 的肿瘤鸡群存在 MDV-1 野毒感染，且多数与 SB-1 疫苗株共存，为免疫失败原因排查提供关键数据。

五、应用前景：低成本、易推广，覆盖全场景

该方法操作简便、无需昂贵仪器、成本低廉，适合各级兽医实验室、养殖企业自检，可广泛用于：

1.临床肿瘤病例快速确诊；

2.野毒与疫苗感染鉴别诊断；

3.鸡群疫苗免疫效果评估；

4.大规模流行病学监测。

团队表示，该技术填补了国内马立克氏病 “一管区分野毒与多疫苗株” 的技术空白，对提升我国禽病精准防控水平、减少养殖损失、保障家禽业健康发展具有重要实用价值。

参考来源：

Zhang WK, Teng M, Zheng LP, et al. Development of a Multiplex PCR Method for Efficient Differential Diagnosis of Clinical Cases and Vaccine Immunization of Marek's Disease. Viruses. 2026;18(4):471. Published 2026 Apr 16. doi:10.3390/v18040471