研究背景

鸭疫里默氏菌病致鸭传染性浆膜炎，重创养鸭业。现有灭活疫苗存在应激、佐剂残留等缺陷，且多为注射免疫，难激活黏膜免疫。我国主流RA血清型为1、2、4等，跨血清型交叉保护弱，缺乏安全高效、适配黏膜免疫的弱毒疫苗，亟需新型疫苗填补空白。

关键突破

双基因缺失重组株构建成功，遗传与生长性状稳定

研究采用无痕基因敲除技术，敲除RA-YM株cas9与sprA双毒力基因，获重组株RA-YMΔcas9ΔsprA，无外源抗性标记。该株体外生长曲线与亲本株无显著差异，连续传30代未发生回复突变，遗传稳定，满足规模化生产要求（图1）。

图1 重组株构建与鉴定、生长曲线及遗传稳定性检测

毒力显著弱化，疫苗安全性大幅提升

雏鸭LD50测定显示，亲本株LD50为7.25×10⁴ CFU，重组株达2.11×10¹⁰ CFU，毒力较亲本株降低约2.91×10⁵倍（表1）。免疫后雏鸭体温、日增重无明显异常，无明显不良反应，安全性良好，符合弱毒疫苗标准（图2）。

表1 重组株与亲本株LD50测定结果

图2 雏鸭攻毒存活曲线

鼻内免疫同步激活黏膜与全身免疫，效果优于肌注

7日龄雏鸭鼻免重组株，可显著提升血清IgY与IFN-γ、IL-6水平；免疫2周后，鼻腔、气管、肺、直肠黏膜sIgA显著升高，肌注仅在气管与肺诱导sIgA上升。鼻免能同步激活黏膜与全身免疫，免疫途径更具优势（图3）。

图3 免疫后抗体与细胞因子及黏膜sIgA检测结果

同血清型强毒攻击保护率优异，临床应用潜力大

免疫2周后用RA-YM与RA-A强毒攻毒，对照组死亡率90%–100%；免疫组对同源株保护率100%，对异源强毒A株鼻免高剂量组保护率达90%，且显著减轻心、肝、脾、脑病理损伤，鼻免效果优于肌注（图4、图5）。

图4 攻毒后雏鸭体温与存活曲线

图5 脏器大体与组织病理变化

结论与展望

本研究成功构建RA-YMΔcas9ΔsprA双基因缺失弱毒疫苗株，兼具安全性、遗传稳定性与强免疫原性。鼻内免疫可同步激活黏膜sIgA与全身IgY免疫，对1型RA强毒攻击保护效果突出，优于传统肌注，突破现有疫苗难以激活黏膜免疫的瓶颈，为我国鸭疫里默氏菌病防控提供新型黏膜疫苗技术支撑。未来将完善疫苗安全与效力评价体系，推进多价黏膜疫苗研发，覆盖我国主流流行血清型，解决单血清型疫苗交叉保护不足的难题，为水禽呼吸道病原黏膜疫苗研制提供参考范式。

参考文献

Hou Y, Zhang Y, Huang J, Li X, Yang X, Zhou Z, Li Z. Intranasal delivery of a live attenuated vaccine confers efficient protection against *Riemerella anatipestifer* serotype 1 in ducklings. Veterinary Microbiology 317 (2026) 111016.