新型细胞培养平台助力H5N1流感疫苗研发

H5N1高致病性禽流感病毒具有较高的跨种传播风险，一旦获得持续人际传播能力，可能引发全球公共卫生事件。目前，大多数流感灭活疫苗仍采用鸡胚生产工艺，但该方法依赖SPF鸡胚供应，生产周期较长，扩产能力有限，在突发疫情中难以快速满足疫苗需求。此外，部分禽流感病毒在鸡胚中的增殖效率较低，还可能因适应性突变影响疫苗抗原特性。

近日，研究人员建立了一套基于无血清悬浮MDCK（Madin-Darby犬肾）细胞的H5N1灭活疫苗生产工艺，涵盖细胞株筛选、病毒培养条件优化、生物反应器放大培养、病毒纯化以及免疫原性评价等完整流程，为流感疫苗规模化生产提供了新的解决方案。

图1 基于MDCK悬浮细胞的H5N1疫苗生产工艺流程示意图

研究首先从多株悬浮培养MDCK细胞中筛选出病毒易感性和增殖能力最优的MDCK-XF04细胞株。随后，研究团队通过系统优化接种细胞密度、感染复数（MOI）、TPCK-胰蛋白酶浓度及收获时间等关键参数，确定最佳生产工艺。在75 L生物反应器中，病毒感染48小时后即可获得血凝效价达到1:1024、病毒滴度约10.07 log₁₀ CCID50/mL的高水平产量，证明该工艺具有良好的放大能力和生产稳定性。

为了保证疫苗安全性，研究团队进一步建立了超滤联合两步层析纯化工艺。该方法能够有效去除宿主细胞蛋白和残留DNA等工艺杂质，使宿主细胞蛋白降至2.20 μg/mL、残留DNA降至3.92 ng/mL，均达到甚至优于相关质量标准。同时，纯化后的病毒颗粒结构完整，保持了良好的抗原完整性，为后续疫苗质量提供了保障。

动物实验结果显示，小鼠经两次免疫后，15 μg抗原剂量组血凝抑制抗体（HI）阳转率达到100%，几何平均抗体滴度（GMT）达到183；5 μg剂量组同样实现100%阳转，但抗体水平略低；1 μg剂量组仅有50%的小鼠产生保护性抗体，说明疫苗具有明确的剂量依赖性免疫效果。

相比传统鸡胚生产工艺，悬浮MDCK细胞培养具有无需依赖鸡胚资源、易于规模放大、批次一致性高、培养周期短等优势，同时能够减少鸡胚适应性突变带来的潜在影响，更适合应对突发疫情下的大规模疫苗生产需求。研究估算，两批75 L生物反应器生产即可获得约9000剂单价H5N1灭活疫苗，显示出良好的工业化应用潜力。

研究人员认为，该平台不仅适用于H5N1流感疫苗研发，还可推广至其他病毒疫苗的生产，为新发、突发传染病疫苗快速研发和产业化提供通用技术支撑。未来，结合更大规模生物反应器和佐剂优化策略，有望进一步提升疫苗产能和免疫保护效果，为全球流感大流行防控提供更加高效、灵活的生产保障。

随着细胞培养疫苗逐渐成为疫苗产业的重要发展方向，稳定、高质量的细胞培养基已成为保障疫苗研发与产业化的重要基础。环凯生物持续布局疫苗培养基领域，推出适用于Vero细胞、MDCK细胞、BHK细胞等多种疫苗生产细胞的系列培养基及工艺解决方案，可满足细胞复苏、扩增、病毒培养及规模化生产等不同阶段需求，为疫苗研发和产业化提供稳定、高效的培养支持，助力新型疫苗研发不断提速。

参考来源：Shaobo Zhang, Meihao Wang, Dongwu Jin, Jiayou Zhang, Jiamin Wang, Zhongren Ma & Jinliang Yang (2026) Development of a pandemic H5N1 influenza vaccine using MDCK suspension cells: A scalable and efficient production platform, Human Vaccines & Immunotherapeutics, 22:1, DOI: 10.1080/21645515.2026.2679784