无血清 MDCK 细胞制备四价流感亚单位疫苗：完整临床前安全性与免疫原性评价

 一、研究背景

季节性流感每年造成全球大量发病与死亡，是长期难以攻克的重大公共卫生难题。当前主流鸡蛋制备流感疫苗存在明显短板：生产高度依赖鸡胚供给，流感大流行时产能极易受限；鸡胚传代易诱发病毒抗原漂移，降低疫苗匹配保护效果；同时成品残留卵蛋白，存在过敏人群使用风险，禽流感疫情还会直接中断疫苗原料供应。

为突破鸡胚工艺短板，无血清哺乳动物细胞培养成为疫苗生产主流升级方向。MDCK 细胞对流感病毒感染敏感性远高于 Vero 等细胞株，无血清悬浮培养可摆脱胰酶、动物血清依赖，便于生物反应器规模化放大，产出病毒抗原与流行株匹配度更高，海外多款 MDCK 流感疫苗已获批上市。但国内自主研发的无血清悬浮 MDCK 四价亚单位疫苗尚缺少系统、完整的临床前安全性与免疫原性数据支撑。该研究以 H1N1、H3N2、BV、BY 四株标准流感毒株为原料，依托自主高密度悬浮 MDCK 工艺制备亚单位疫苗，开展大鼠、兔、豚鼠多物种全维度毒理与小鼠免疫效力试验，完整验证疫苗临床前应用潜力。

 二、研究内容与结果

1. 疫苗制备工艺

选用 4 株 WHO 推荐流感毒株感染无血清悬浮 MDCK 细胞，经病毒收获、亲和层析、密度梯度、离子交换多级纯化、灭活裂解后分价配制成四价亚单位疫苗，全程无外源动物蛋白添加，已完成临床试验注册备案。

2. 全套临床前安全性评价

1）大鼠单次 / 重复肌肉毒性：高低剂量疫苗给药后，大鼠进食、体重、脏器重量无异常；血常规、生化、凝血、CD4/CD8 淋巴细胞比例、IFN-γ、IL-2、IL-4 细胞因子均无统计学异常，各脏器无病理损伤。

2）兔肌肉刺激试验：疫苗注射部位无红肿、坏死，恢复期组织切片未见炎性病变，无局部刺激性。

3）豚鼠全身过敏试验：阳性对照组出现呼吸困难、抽搐死亡，疫苗高低剂量组无任何过敏反应，无全身致敏风险。

4）大鼠生殖与围产期毒性：雌雄大鼠交配周期、黄体着床数量、胎鼠骨化、活胎率、子代发育指标均无异常，疫苗不影响生育、无致畸、无围产期毒副作用。

3. 小鼠免疫原性结果

图1 MDCK 细胞源四价流感亚单位疫苗诱导小鼠针对四种流感毒株血凝抑制抗体水平

设置 3μg / 株、1μg / 株两组免疫剂量，分别在 0、28 天两针免疫，28、42 天采血检测抗体：42 天所有组别针对 H1N1、H3N2、BV、BY 的 HI 血清阳转率达到 100%，抗体滴度呈剂量正相关；微量中和试验显示 42 天高剂量组中和抗体 GMT 最高可达数千倍，显著高于对照组，证明疫苗可诱导强效广谱保护性抗体。

 三、研究总结

该研究建立成熟无血清悬浮 MDCK 细胞四价流感亚单位疫苗生产工艺，覆盖急性、长期重复、肌肉刺激、全身过敏、生殖发育全系列临床前毒理试验，多动物模型证实疫苗安全性良好，无系统、局部、生殖毒性与致敏风险。小鼠免疫试验证明该疫苗可高效诱导四种流行株特异性血凝抑制、中和抗体，免疫应答水平优异。

后续可从两方面进一步完善研究：一是推进人体临床试验，验证疫苗在人群中的真实保护效果；二是可搭配新型佐剂开展优化试验，进一步提升疫苗介导细胞免疫的能力，拓宽交叉防护范围。

参考来源：Li S, Lv J, Li X, Yang Y, Yan Y, Sui L and Wu Y (2026) Preclinical immunogenicity and safety evaluation of MDCK cell-derived quadrivalent influenza virus subunit vaccine. Front. Immunol. 17:1827059. doi: 10.3389/fimmu.2026.1827059