灵芝孢子油可以缓解心理应激诱发的肿瘤

 心理应激被证实会抑制免疫功能，增加癌症风险，尤其对卵巢癌（OC）等恶性肿瘤，其在抑郁、焦虑人群中发病率更高，需明确应激促进肿瘤进展的机制以寻找治疗靶点。巨噬细胞占实体肿瘤微环境（TME）细胞的 50%，其吞噬功能依赖受体 - 配体相互作用、信号转导（如磷脂代谢相关通路），其中Fcγ 受体介导的吞噬是免疫系统直接清除病原体和肿瘤细胞的重要机制。灵芝孢子油（GLSO）是通过超临界 CO₂萃取破壁灵芝孢子获得的脂质物质，含灵芝三萜（GLTs）等活性成分，在传统典籍（如《神农本草经》）及《中国药典 2020》《美国药典 2021》中被认可，已有研究提示其可增强免疫、延长肿瘤患者生存期，但具体调控机制不明。

暨南大学何蓉蓉研究团队在Chinese Medicine（Q1,IF5.7）杂志发表Ganoderma lucidum spore oil alleviates psychological stress-evoked tumor progression by enhancing FcγR-mediated macrophage phagocytosis研究。该研究阐明 GLSO 缓解心理应激诱发肿瘤进展的机制，重点探究其对巨噬细胞吞噬功能的影响及相关分子通路。

小鼠在肿瘤接种前 3 天及接种后 3、9、15、21 天施加 18h 束缚应激，于接种后 7、21 天用活体成像监测肿瘤生长。设应激 + GLSO-L（2.5g/kg，5 倍人有效剂量）、应激 + GLSO-H（5g/kg，10 倍人有效剂量）组，每日给药，第 6 天施加 18h 应激，第 7 天腹腔注射 ID8-CMFDA 细胞，第 8 天检测巨噬细胞吞噬率。增设应激 + LEPT（16mg/kg）（一种公认的免疫调节剂临床阳性对照）组，给药 28 天，其余处理同第一批，验证 GLSO 长期干预效果。

（一）心理应激通过脂溶性成分抑制巨噬细胞吞噬，促进肿瘤进展

1.肿瘤生长加速：活体成像显示，应激组小鼠接种 ID8-Luc 细胞后 7 天、21 天的平均辐射效率显著高于对照组（P<0.05），提示应激促进卵巢癌进展。

2.巨噬细胞吞噬功能下降：流式结果显示，应激组小鼠腹腔肿瘤细胞数量比对照组增加，腹膜巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬率显著降低（P<0.05）；体外实验中，应激小鼠血浆处理 RAW264.7 细胞后，其吞噬荧光微球能力也下降。

3.关键抑制成分确定：通过 Folch 法分离血浆水溶性（WSF）和脂溶性（LSF）成分，发现仅应激小鼠的 LSF 可显著抑制巨噬细胞吞噬（P<0.001），WSF 无显著作用，表明脂溶性成分是应激抑制吞噬的关键。

图 1 心理应激诱发的肿瘤进展由脂溶性成分损伤巨噬细胞吞噬功能所致

A 束缚应激条件下小鼠卵巢癌模型的实验方案示意图。B、C 采用活体成像系统监测小鼠肿瘤生长情况，并对平均辐射效率进行定量分析。D、E 向小鼠腹腔注射 CMFDA 标记的 ID8 细胞，24 小时后收集腹腔灌洗液；用 APC 抗小鼠 F4/80 抗体标记腹腔巨噬细胞，通过流式细胞术定量检测小鼠腹腔内肿瘤细胞数量及腹腔巨噬细胞的吞噬率。F 流式细胞术分析经束缚应激小鼠血浆预处理的巨噬细胞对荧光微球的吞噬活性。G 筛选小鼠血浆中水溶性或脂溶性成分作用效果的示意图。H、I 用小鼠血浆的水溶性组分或脂溶性组分处理 RAW264.7 巨噬细胞 4 小时，随后与荧光微球共孵育 40 分钟，通过流式细胞术测定其吞噬率。数据以平均值 ± 标准误（mean ± SEM）表示（n=3）。采用非配对双尾 Student's t 检验（D-F、I）或单因素方差分析（ANOVA）结合最小显著差异法（LSD）（C）进行统计学分析。与对照组（Con）相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；与二甲基亚砜组（DMSO）相比，****P<0.001；与脂溶性组分对照组（LSF-Con）相比，ΔΔθρ<0.001。注：WSF 为水溶性组分（water-soluble fractions），LSF 为脂溶性组分（liposoluble fractions）。

（二）溶血磷脂酰肌醇LPI（18:0）是应激下抑制巨噬细胞吞噬的关键脂溶性成分

1.磷脂代谢紊乱：LC-MS/MS 磷脂组学分析显示，应激组小鼠血浆中磷脂酰肌醇（PI） 含量降低，溶血磷脂酰肌醇（LPI） 含量升高（P<0.05），且 LPI（18:0）亚型含量增幅最显著。

2.LPI（18:0）的抑制作用：体外实验中，LPI（18:0）以剂量依赖性方式抑制 THP1 巨噬细胞吞噬荧光微球（2.5μM、5μM、10μM 处理组吞噬率依次降低，P<0.05），且 10μM LPI（18:0）可显著抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬（P<0.01）。

图 2 溶血磷脂酰肌醇（LPI）被确认为应激状态下抑制巨噬细胞吞噬功能的关键成分

A、B 磷脂与溶血磷脂的相对浓度。C、D 束缚应激小鼠血浆中磷脂酰肌醇（PI）的二级质谱（MS²）分析（n=6）。E 磷脂酰肌醇（PI，18:0/18:2）与溶血磷脂酰肌醇（LPI，18:0）的化学结构式。F、G 用不同浓度的 LPI（18:0）处理人单核细胞白血病细胞（THP1）来源的巨噬细胞后，与荧光微球共孵育 40 分钟，通过流式细胞术测定其吞噬率（n=3）。H 用流式细胞术评估经 10μM LPI（18:0）处理 4 小时的 THP1 巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬活性（n=3）。I 展示 LPI 抑制巨噬细胞吞噬功能的示意图。注：PI 为磷脂酰肌醇（phosphatidylinositols），PA 为磷脂酸（phosphatidic acid），PC 为磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine），PE 为磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine），PG 为磷脂酰甘油（phosphatidylglycerin），PS 为磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine），LPI 为溶血磷脂酰肌醇（lysophosphatidylinositols），LPA 为溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid），LPC 为溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine），LPE 为溶血磷脂酰乙醇胺（lysophosphatidylethanolamine），LPG 为溶血磷脂酰甘油（lysophosphatidylglycerol），LPS 为溶血磷脂酰丝氨酸（lysophosphatidylserine）。

（三）GLSO 通过增强巨噬细胞吞噬，缓解应激诱发的肿瘤进展

1.短期干预效果：第二批实验中，应激 + GLSO-H 组小鼠腹腔肿瘤细胞比例显著低于应激组（P<0.05），腹膜巨噬细胞吞噬率显著高于应激组（P<0.05），GLSO-L 组效果不显著。

2.长期干预效果：第三批实验中，GLSO（2.5g/kg、5g/kg）组小鼠 21 天肿瘤辐射效率显著低于应激组（P<0.05），腹腔肿瘤细胞数量减少，巨噬细胞吞噬率恢复（P<0.05），且 5g/kg GLSO 效果优于 LEPT（16mg/kg）。

图 3 灵芝孢子油（GLSO）通过增强巨噬细胞吞噬功能缓解肿瘤进展

A 短期实验设计示意图。B、D 采用流式细胞术检测小鼠腹腔内 ID8 细胞（小鼠卵巢癌细胞）的占比。C、E 采用流式细胞术评估小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率。F 长期实验设计示意图。G、H 采用活体成像系统监测小鼠肿瘤生长情况，并对平均辐射效率进行定量分析。I、K 在肿瘤接种后第 21 天，评估小鼠体内 ID8 细胞的占比。J、L 在肿瘤接种后第 21 天，评估小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。M 展示灵芝孢子油（GLSO）缓解应激诱导的巨噬细胞吞噬功能损伤的示意图。注：GLSO 为灵芝孢子油（Ganoderma lucidum spore oil），ID8 细胞是常用的小鼠卵巢癌上皮细胞系，常用于构建卵巢癌动物模型；“平均辐射效率” 是活体成像中反映肿瘤细胞数量与活性的关键指标，数值越高通常代表肿瘤负荷越大。

（四）灵芝孢子油（GLSO） 通过调节 LPI/FcγRIII/SYK 通路恢复巨噬细胞吞噬功能

1.通路筛选：RNA-seq 分析显示，应激组与对照组相比有 1949 个上调 DEG、820 个下调 DEG；GLSO 处理后，与应激组相比有 295 个上调 DEG、99 个下调 DEG；305 个重叠 DEG 富集于 “吞噬作用”“FcγR 介导的吞噬通路” 等生物过程（KEGG 通路：mmu04666）。

图 4 Fcγ 受体（FcγR）是灵芝孢子油（GLSO）缓解应激诱导的吞噬功能抑制的关键作用靶点

A 检测经溶血磷脂酰肌醇（LPI）或 CID16020046（GPR55 受体拮抗剂）处理后巨噬细胞的吞噬率。数据以平均值 ± 标准误（mean ± SEM）表示（n=3）。采用 Tukey 单因素方差分析（one-way ANOVA）确定 P 值，与对照组（Con）相比，***P<0.001。B、C 差异表达基因的火山图（分别为 “应激组 vs 对照组”“应激 + GLSO 组 vs 应激组”）（n=5）。D 韦恩图展示通过 RNA 测序（RNA-seq）筛选出的 “应激组 vs 对照组” 与 “应激 + GLSO 组 vs 应激组” 的差异基因及重叠基因。E 对 305 个重叠差异基因进行基因本体论（Gene Ontology, GO）生物学过程富集分析。F 对与吞噬作用相关的 305 个重叠差异基因进行京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）通路分析。G、H 基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis, GSEA）显示的 Fc 受体通路介导的吞噬通路相关核心基因，及核心基因的火山图。注：“火山图” 是科研中展示差异基因的常用图表，横轴通常为基因表达变化倍数（如 log₂Fold Change），纵轴为差异显著性（如 - log₁₀P 值），显著差异基因通常分布在图的两侧；“韦恩图” 用于展示多组数据间的重叠关系，图中重叠区域代表各组共有的差异基因；GSEA 是通过分析基因集在不同样本中的富集程度，挖掘潜在关键通路的分析方法。

2.关键分子验证

FcγRIII 表达：LPI（18:0）处理后，THP1 细胞中 FCGR3 基因 mRNA 表达降低（P<0.05），FcγRIII 蛋白水平下降（P<0.05）；GLSO 预处理可逆转该降低（P<0.05）。SYK 磷酸化：LPI（18:0）处理使 THP1 细胞中 p-SYK 蛋白水平降低（P<0.05），GLSO 可恢复 p-SYK 水平（P<0.05），SYK 总蛋白无显著变化。

图 5 溶血磷脂酰肌醇（LPI）介导巨噬细胞中 FcγRIII/SYK/p-SYK 吞噬信号通路的抑制

A、B 用溶血磷脂酰肌醇（LPI，18:0 亚型，10 μM）处理人单核细胞白血病细胞（THP1）来源的巨噬细胞 18 小时；用抗 CD16/CD32 抗体标记 FcγRIII（III 型 Fcγ 受体）/FcγRII（II 型 Fcγ 受体），通过激光共聚焦技术进行检测，并对 FcγRII/FcγRIII 蛋白表达的平均荧光强度进行定量分析。C 检测经 LPI（18:0）处理的 THP1 巨噬细胞中 FCGR3 基因的 mRNA 表达水平（FCGR3 为编码 FcγRIII 的基因）。D、E 检测经 LPI（18:0）处理的 THP1 巨噬细胞中 FcγRIII、脾酪氨酸激酶（SYK）及磷酸化脾酪氨酸激酶（p-SYK）的蛋白表达水平。F 展示 LPI（18:0）介导巨噬细胞中 FcγRIII/SYK/p-SYK 吞噬信号通路抑制作用的示意图。注：FcγR（Fc gamma receptor）即 Fcγ 受体，是免疫细胞表面介导吞噬、免疫调节等功能的关键受体；SYK（spleen tyrosine kinase）即脾酪氨酸激酶，其磷酸化形式（p-SYK）是吞噬信号通路中的重要激活分子，可调控下游吞噬相关蛋白的表达与功能。

3.GPR55 非关键通路：用 GPR55 拮抗剂 CID16020046 与 LPI（18:0）共处理细胞，无法缓解 LPI（18:0）对吞噬的抑制，提示 GPR55 不参与该过程。

图 6 灵芝孢子油（GLSO）缓解溶血磷脂酰肌醇（LPI）介导的 FcγRIII/SYK/p-SYK 吞噬信号通路抑制

 A、B 用佛波醇 - 12 - 豆蔻酸 - 13 - 乙酸酯（PMA，200 nM）处理人单核细胞白血病细胞（THP1 细胞）2 天，随后用灵芝孢子油（GLSO，浓度分别为 0.05、0.1 mg/ml）预处理 24 小时，最后用溶血磷脂酰肌醇（LPI，18:0 亚型，10 μM）处理 18 小时；用抗 CD16/CD32 抗体标记 FcγRIII/FcγRII，通过激光共聚焦技术检测，并对 FcγRII/FcγRIII 蛋白表达的平均荧光强度进行定量分析。C 检测经灵芝孢子油（GLSO）处理与未处理的 THP1 巨噬细胞中 FCGR3 基因的 mRNA 表达水平。D、E 检测经灵芝孢子油（GLSO）处理与未处理的 THP1 巨噬细胞中 FcγRIII、脾酪氨酸激酶（SYK）及磷酸化脾酪氨酸激酶（p-SYK）的蛋白表达水平。F 灵芝孢子油（GLSO）缓解溶血磷脂酰肌醇（LPI，18:0 亚型）介导的巨噬细胞中 SYK/p-SYK 轴吞噬抑制作用。注：FcγRIII 为 III 型 Fcγ 受体（Fc gamma receptor III），SYK 为脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase），p-SYK 为磷酸化脾酪氨酸激酶（phosphorylated spleen tyrosine kinase），FCGR3 为编码 FcγRIII 的基因，PMA 是常用的细胞分化诱导剂，可诱导 THP1 细胞分化为巨噬细胞样细胞。

结论

心理应激通过升高血浆中LPI（18:0） ，抑制FcγRIII/SYK/p-SYK 信号通路，削弱巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬能力，最终促进肿瘤形成。灵芝孢子油（GLSO） 可通过调节LPI/FcγR 介导的吞噬相关通路，恢复 FcγRIII 表达和 SYK 磷酸化水平，增强巨噬细胞吞噬功能，从而缓解心理应激诱发的肿瘤。GLSO 有望成为心理应激相关肿瘤形成的潜在治疗干预手段，为肿瘤辅助治疗提供新方向。

文献链接：https://doi.org/10.1186/s13020-025-01168-0