灵芝菌丝体天然硒化多糖的生物活性比较研究

硒作为人体必需微量元素，参与合成谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和硒半胱氨酸等关键物质^[1]。全球性硒缺乏问题可引发代谢综合征、慢性病及恶性肿瘤^[2]；有机硒因其高安全性和生物利用度（相较于毒性强、不稳定的无机硒），成为理想的硒补充形式——然而天然硒多糖存在开发瓶颈​：仅少数植物/微生物可合成，且普遍硒含量低、产量稀缺^[3]。灵芝（Ganoderma lucidum ），也被称为赤芝，是世界上研究最多的药用蘑菇品种^[4]。灵芝多糖（GLPs）是主要的活性成分，具有广泛的生物活性，包括抗肿瘤、免疫调节、抗氧化和降脂特性，其菌丝体通过深层发酵技术​（周期仅3–4周，显著优于子实体的数月培养周期）高效转化无机硒为有机形式，但现有研究多聚焦孢子/子实体粗提硒多糖，对菌丝体纯化硒多糖的结构与活性认知仍存空白^[5-8]。

华南理工大学吴晖教授带领的团队在International Journal of Biological Macromolecules （Q1, if: 8.7）发表Purification and comparative study of bioactivities of a natural selenized polysaccharide from Ganoderma lucidum mycelia相关研究。

一、富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖对巨噬细胞存活率的影响

MTT法用于评估SeMPN（硒化灵芝菌丝体多糖）和MPN（灵芝菌丝体多糖）治疗对RAW264.7细胞存活率的影响。如图A所示，RAW 264.7细胞的活力大于98%，表明在62.5至4000 g/mL的浓度范围内，这两种多糖对RAW 264.7巨噬细胞均无毒。在1000μg/mL至2000μg/mL的浓度下，这两个多糖在实验前几乎达到了巨噬细胞适度活化的最大程度，因此后续研究的浓度范围确定为62.5至1000μg/mL。

二、富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖对RAW 264.7细胞吞噬能力的影响

巨噬细胞的激活是免疫反应的重要组成部分。分别基于中性红和大肠杆菌（FITC标记）的摄取来确定富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖对RAW 264.7细胞的吞噬活性和吞噬活性的影响。图B-D表明，与对照组相比，富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖均以剂量依赖的方式显著增加了中性红和大肠杆菌的摄取（p<0.05）。然而，当浓度低于250μg/mL时，富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖之间没有统计学上的显著差异，表明大多数巨噬细胞没有被免疫激活。当富硒菌丝体多糖的浓度大于250μg/mL时，它比普通菌丝体多糖显著增强RAW264.7细胞的吞噬作用（p<0.05）。因此，我们的研究结果表明，富硒菌丝体多糖在RAW 264.7细胞中表现出相当大的硒非依赖性免疫增强作用，显著提高了小分子的吞噬能力和大分子的吞噬功能。

富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖对RAW264.7细胞存活率的影响（A）；基于中性红的摄取，富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖对RAW 264.7细胞吞噬活性的影响（B）；500μg/mL 富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖诱导的RAW 264.7细胞吞噬中性红的光学显微照片（C）；富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖通过吞噬FITC标记的大肠杆菌对RAW 264.7细胞吞噬能力的影响（D）；通过Griess法和ELISA试剂盒使用酶标仪测定NO和细胞因子的分泌水平。通过荧光显微镜拍摄荧光显微图像。

三、富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖对RAW 264.7细胞TNF-α、IL-6和NO生成的影响

NO、TNF-α和IL-6是遍布全身的重要生物活性分子，参与多种病理生理过程，包括宿主防御系统、炎症和免疫紊乱。除了NO的产生，巨噬细胞的激活还会增加细胞因子（TNF-α和IL-6）的产生。为了进一步评估富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖的免疫刺激作用，测定了RAW 264.7细胞中TNF-α、IL-6和NO的水平。两种多糖均能剂量依赖性地增加RAW 264.7细胞中TNF-α、IL-6和NO的产生（所有细胞的p<0.05，图A-C）。此外，当富硒菌丝体多糖的浓度大于500μg/mL时，富硒菌丝体多糖治疗组的值明显高于普通菌丝体多糖治疗小组。

富硒菌丝体多糖和普通菌丝体多糖对RAW 264.7细胞处理24小时后TNF-α（A）、IL-6（B）和NO（C）分泌水平的影响。不含富硒菌丝体多糖或普通菌丝体多糖的组作为空白组，LPS作为阳性对照组。

四、结论

与MPN相比，富硒菌丝体多糖通过刺激吞噬作用和提高RAW 264.7细胞TNF-α、IL-6和NO的产生来产生更大的免疫刺激作用。本研究证实，G. Lucidums菌丝体多糖是基于深层培养产生高硒含量和生物活性的天然多糖的绝佳选择。

参考文献

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