灵芝发酵小麦副产物挖到宝!这款多糖兼具降脂 + 乳化双重功能
灵芝发酵小麦副产物挖到宝!这款多糖兼具降脂 + 乳化双重功能
小麦麸皮是小麦加工产生的大宗农业副产物,富含阿拉伯木聚糖等膳食纤维,但天然致密细胞壁结构限制多糖提取与功能开发。固态发酵依托真菌自身完整酶系,可绿色改造植物多糖结构、提升生物活性。
山东农业大学张锦丽、侯汉学课题组,在国际食品领域期刊《Food Research International》(Q1,IF:8.0)发表Structural characterization, lipid-lowering activity, and emulsifying properties of polysaccharides derived from wheat pericarp via Ganoderma lucidum solid-state fermentation,系统解析灵芝固态发酵小麦麸皮多糖 FPP-1-b 的精细结构,并同步验证其体外降脂活性与天然乳化应用潜力。
本研究利用灵芝固态发酵改造小麦麸皮多糖,成功分离出低分子量阿拉伯木聚糖 FPP-1-b,既能改善肝细胞脂质堆积、抗氧化抗炎,还能作为天然乳化剂搭配大豆蛋白制备稳定乳液。
发酵与多糖分离纯化
采用灵芝 5 号菌株,26 ℃固态发酵小麦果皮 6 d;超声辅助热水浸提、乙醇沉淀,经脱蛋白、脱淀粉、透析冻干获得粗多糖 FPP;依次通过 DEAE-52 阴离子交换层析、Sephadex G-100 凝胶过滤层析纯化,筛选降脂活性最优低分子量组分 FPP-1-b。分子量特征:FPP-1-b 平均分子量仅 2.29 kDa,GPC 呈单一对称峰,分子量分布均一;对比未发酵小麦麸皮多糖(分子量百 kDa 级别),灵芝分泌糖苷酶实现多糖降解解聚,小分子多糖更易被细胞吸收,利于发挥生理活性。单糖组成:由岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖组成,摩尔比 0.43:27.63:9.08:13.97:31.12:17.78,木糖、阿拉伯糖为主要组分,证明主体为小麦源阿拉伯木聚糖;发酵新增岩藻糖、甘露糖,来源于灵芝自身多糖合成与糖链修饰。 空间与微观结构:无稳定三螺旋构象;XRD 仅出现宽弥散峰,以无定形结构为主,水溶性良好;热稳定性优良,150 ℃以内仅脱去自由水,适配食品热加工;SEM、AFM 显示样品呈疏松多孔碎片状,分子缠绕程度低。糖链骨架:主链为 1,4-β-D - 木聚糖,木糖残基 C2、C3 位存在大量分支点,连接阿拉伯糖、甘露糖侧链,分支度 DB=0.66,大量亲水羟基与弱疏水骨架赋予多糖两亲特性。
图 1 FPP-1-b 的分离纯化及基础结构表征。(A) FPP-1-b 纯化流程示意图;(B) 紫外 - 可见光谱图;(C) FPP-1-b 凝胶渗透色谱图;(D) FPP-1-b 高效阴离子交换色谱图。
SEM、AFM 显示样品呈疏松多孔碎片状,分子缠绕程度低。糖链骨架:主链为 1,4-β-D - 木聚糖,木糖残基 C2、C3 位存在大量分支点,连接阿拉伯糖、甘露糖侧链,分支度 DB=0.66,大量亲水羟基与弱疏水骨架赋予多糖两亲特性。
图 2 FPP-1-b 的结构与微观形貌表征。(A) 刚果红试验;(B) X 射线衍射图谱;(C) 热重分析曲线;(D) 扫描电镜图像;(E) 原子力显微镜图。
FPP-1-b 可缓解肝细胞脂质蓄积,抗氧化、抗炎、减轻肝损伤
在安全浓度 12.5–100 μg/mL 范围内,FPP-1-b 呈浓度依赖性发挥降脂保护作用:脂质代谢调控:显著降低胞内总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白,提升高密度脂蛋白含量,改善细胞脂质紊乱;抗氧化保护:提升 SOD、GSH-Px、CAT 抗氧化酶活性,清除过量活性氧,缓解高脂诱导氧化应激;抗炎护肝:下调 TNF-α、IL-6 促炎因子表达,降低 ALT、AST 肝损伤酶活性,减轻脂质过载引发的肝细胞损伤。
图 3 FPP-1-b 对油酸诱导 HepG2 细胞胞内脂质蓄积的影响。(A) 总胆固醇(TC);(B) 甘油三酯(TG);(C) 高密度脂蛋白(HDL);(D) 低密度脂蛋白(LDL)。 试验设置 FPP-1-b 浓度为 12.5、25、50、100 μg/mL,阳性对照洛伐他汀浓度 30 μmol/L(分子量 404.5 g/mol,约 12.14 μg/mL)。 *p<0.05、**p<0.01、***p<0.001:与空白对照组相比具有显著性差异; #p<0.05、##p<0.01、###p<0.001:与油酸模型组相比具有显著性差异。
图 4 FPP-1-b 对油酸处理 HepG2 细胞氧化应激、炎症反应及肝细胞损伤相关指标的影响。(A) 超氧化物歧化酶(SOD);(B) 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px);(C) 过氧化氢酶(CAT);(D) 肿瘤坏死因子 -α(TNF-α);(E) 白介素 - 6(IL-6);(F) 丙氨酸氨基转移酶(ALT);(G) 天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。 *p<0.05、**p<0.01、***p<0.001,表示与空白对照组相比差异显著; #p<0.05、##p<0.01、###p<0.001,表示与油酸模型组相比差异显著。
多糖具备两亲界面特性,可协同大豆蛋白提升乳液稳定性
界面特性:三相接触角 86.66°,中等润湿性,兼具亲水羟基与疏水糖环,天然具备两亲性,可吸附于油水界面形成界面膜;分子相互作用:FPP-1-b 与大豆分离蛋白依靠氢键发生分子结合,轻微改变蛋白二级结构;最优添加区间:多糖终浓度 0.50%–0.75%(w/v)时,乳液液滴细小均匀,乳化活性、储存稳定性最优,体系呈现弱凝胶粘弹性;过量添加弊端:多糖浓度达 1.00% 时,未吸附游离多糖引发耗尽絮凝,液滴聚集、粒径增大,乳液稳定性下降。
图 5 不同多糖添加量制备的大豆分离蛋白 / FPP-1-b 复合乳液乳化性能。(A) 乳化活性(EA);(B) 乳化稳定性(ESt);(C) 储存稳定性(ESs);(D) 乳液静置 0 d、7 d、14 d 的实物照片。
图 6 不同多糖终浓度制备的大豆分离蛋白 / FPP-1-b 复合乳液: 显微图像 (A)、体积平均粒径D4,3与表面积平均粒径D3,2(B)、平均粒径 (C) 及 Zeta 电位 (D)。
讨论
灵芝固态发酵是小麦麸皮绿色高值化的有效途径,微生物分泌降解酶可将大分子阿拉伯木聚糖降解为短链、高分支 FPP-1-b,发酵修饰是多糖获得双重功能的核心基础。FPP-1-b 是兼具降脂活性与乳化性能的多功能天然多糖,既可作为功能性食品原料调节脂质代谢,也可作为天然乳化辅料构建蛋白复合乳液,用于脂溶性活性物质包埋递送。产业应用前景:依托粮油加工副产物,结合食药用微生物固态发酵工艺,可低成本制备多功能食品配料,契合绿色制造、大健康食品产业发展方向。
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