基于杂交链式反应和三重DNA的副溶血性弧菌无酶荧光共振转移方案

  副溶血性弧菌是引起食源性疾病的重要病原菌之一，而目前常规的检测方法通常表现出时间长、过程复杂、敏感性不够等缺点，因此，开发一种快速、灵敏检测食源性致病菌的新方法是十分重要的。

  什么是副溶血性弧菌？

  副溶血性弧菌是一种病原菌，为革兰氏阴性杆菌，可以呈多种形状，比如弧状、杆状、丝状等，主要栖息地是海水中。海产品，如墨鱼、海鱼、海虾、海蟹、海蜇，以及含盐分较高的腌制食品，如咸菜、腌肉等都可能携带副溶血性弧菌，感染副溶血性弧菌后在临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。

  怎么检测副溶血性弧菌？

  在本文中，作者介绍了一种基于HCR扩增、FRET和三重DNA的VP DNA无酶荧光检测平台。在VP DNA的存在下，可以与分子信标(MB)杂交，释放MB的发夹结构。MB的游离端可以触发HCR反应，并交替补充H1-TAMRA和H2形成长缺口dsDNA。HCR产物可被TFO-FAM识别并形成三链DNA。因此，TAMRA和FAM通过三重DNA的形成更紧密地结合在一起，导致FRET过程，在520 nm处的荧光强度显著降低。

  图 1 检测示意图

  结论：本研究构建了基于HCR扩增、FRET和三重DNA的无酶荧光敏感检测平台，可对VP DNA进行灵敏、选择性检测。在VP DNA存在的情况下，MB发夹结构被打开，触发HCR过程产生dsDNA。当加入TFO-FAM时，TFO-FAM与HCR产物杂交形成一个三重DNA, TFO-FAM和H1-TAMRA上的供体和受体相互接近，导致FRET过程。用荧光猝灭值定量检测目标VP DNA，检测限为35 pmol L−1。该方法在DNA诊断和临床分析领域具有广阔的应用前景。

  参考文献：Tan XH, Li YB, Liao Y, Liu HZ. An enzyme free fluorescence resonance transfer strategy based on hybrid chain reaction and triplex DNA for Vibrio parahaemolyticus. Sci Rep. 2020 Nov 26;10(1):20710. doi: 10.1038/s41598-020-77913-2. PMID: 33244061; PMCID: PMC7691504.