肉类加工生产环境中李斯特菌的遗传多样性

　　对于欧盟国家来说，与单核细胞增生李斯特菌有关的工作环境的控制是一个特别关注的主题。另外两种严格李斯特菌，即无害李斯特菌和威尔士李斯特菌，也作为生产环境的单核细胞增生李斯特菌污染/定植指标受到控制。2012年，ECDC(欧洲疾病预防和控制中心)在 EU/EEA(欧盟/欧洲经济区)的食源性病原体监测中引入了确定基因型的分子方法。2019 年 3 月，EC-DC 在欧盟/欧洲经济区引入了全基因组测序 (WGS)，用于监测侵袭性李斯特菌病。2021 年，在 COVID-19 大流行期间，ECDC 对李斯特菌血清学和分子检测。

　　在美国，2011年通过了第一个预防性食品控制法规，包括监测食品加工厂中的单核李斯特菌。2019 年，美国食品和药物管理局 (FDA) 发布了食品安全法规，定义了从动物饲养到食品生产的控制策略，包括设备、工具和设施的控制。

　　李斯特菌的全基因组测序已成为一项多中心研究的工具之一，该研究于2018年底由Gamaleya流行病学和微生物学研究所研究。WGS补充了多位点序列分型(MLST)和多毒力序列分型的方法，这些方法确定了李斯特菌的基因型和内蛋白的谱，这些蛋白是确保李斯特菌侵入真核细胞的蛋白质。分子遗传学数据使得在COVID-19之前和大流行期间莫斯科地区单核细胞增生李斯特菌的临床和食物分离株的表征成为可能。本文将积累的经验应用于莫斯科两家肉类加工厂分离物的试点研究。这项工作的目的是确定从生产不同地点进行的拭子中分离出的李斯特菌的遗传特征，作为进一步监测持久性基因型李斯特菌的基础。

　　2019-2020年，莫斯科的两家肉类加工厂接受了检查。两家企业都使用猪肉和家禽(俄罗斯生产)以及牛肉(俄罗斯和白俄罗斯生产)作为原材料。根据分区原则选择生产环境的控制对象。这些区域的特征和确定的分离株见表1.浸渍有 Letheen 肉汤的无菌海绵(用于洗涤。肉汤的成分(卵磷脂和聚山梨醇酯80)中和季铵化合物和六铬酚，用于对工作环境进行消毒，以及酚类消毒剂和福尔马林，用于医疗机构的消毒。在 1 号工厂，我们收集了 41 个拭子;在2号工厂，38个拭子。

　　在莫斯科两家肉类加工厂获得的拭子中李斯特菌的初步研究表明，生产环境中存在李斯特菌，并有可能描述它们的遗传特征，这对于目前与国内和国际数据的比较以及随后追踪持久性单核细胞增生李斯特菌是必要的基因型：ST8、ST321、ST121和CC9(ST2330)，我们在莫斯科的生产设施中检测到。根据法国研究人员对法国国家李斯特菌参考中心的7342株分离株获得的数据，单核细胞增生李斯特菌CC121和CC9与食品密切相关，CC8和CC321是中间体，即在产品和临床标本中均存在。同时，在奥地利，单核细胞增生李斯特菌CC8和CC9在肉制品中更常见，而CC121较少被发现，在一项对加拿大和瑞士收集菌株的联合研究中，单核细胞增生李斯特菌CC8和CC9在食品中占主导地位，CC321的检出率较低，CC121仅在个别病例中发现。

　　在第二家食品生产厂中，我们分离出两种基因型的李斯特菌，ST2331 和 ST1005.其基因组特征表明它们对生产条件和动物胃肠道代谢特性的适应能力。一项针对英国和爱尔兰食品生产设施的研究也发现了威尔士乳杆菌，该菌含有对消毒剂、镉和质粒的抗性基因，属于持久性污染物。在康奈尔大学(美国)的一个项目实施过程中，根据全基因组测序的结果，表明在生产环境中持续存在的李斯特菌与土壤中的分离株不同，这证实了李斯特菌在适应生产条件时会进化。

　　参考文献: Voronina, O. L., Ryzhova, N. N., Aksenova, E. I., Kunda, M. S., Kutuzova, A. V., Karpova, T. I., Yushina, Y. K., and Tartakovsky, I. S. (2023) Genetic Diversity of Listeria Detected in the Production Environment of Meat Processing. Molecular Genetics, Microbiology and Virology 38. 21-28.