一般分子检测可检测到的诺如病毒约50%不具有感染性

诺如病毒是全球所有年龄段人群急性胃肠炎病例和暴发的主要原因。贝类是消费者的一个重要的暴露途径，一些证据表明，感染的风险随着贝类中检测到的诺如病毒浓度的增加而增加。然而，一般PT-PCR检测仅对基因组的检测，为了检测真正有感染性的完整颗粒数量，Rexin等人使用20个具有代表性的阳性贝类样本，逆转录（RT）数字液滴 PCR（ddPCR）来确定经过RNase处理去除游离RNA前后的诺如病毒精确浓度变化，以更好地了解公共卫生风险并帮助评估监管商业贝类市场准入的安全阈值的适用性。

首先使用ISO 15216方法的修改版本从贝类中回收了病毒，并全程使用鼠诺如病毒作为过程对照。每个贝类匀浆制备两个等分式样，分别经过或不经过RNase处理。通过两步法 RT-qPCR 测定确定诺如病毒 GI 和/或 GII 的存在。对样品进行诺如病毒 GI 和 GII 两步法 RT-ddPCR 检测，有和没有 RNase 处理。

使用 RT-qPCR，阳性样品中的诺如病毒浓度范围为 GI 的 <80 至 450 GC/g （n = 11），GII 的消化组织浓度为 <80 至 11,630 GC/g （n = 18）。诺如病毒 GI 和 GII 浓度中位数分别为 205 GC/g 和 795 GC/g 消化组织。使用 RT-ddPCR（无 RNase 预处理），与诺如病毒疾病相关的贝类中GI诺如病毒浓度为 37 至 464 GC/g（诺如病毒）（n = 8），诺如病毒 GII（n = 18）消化组织为 44 至 4,267 GC/g（如图1）。诺如病毒 GI 和 GII 浓度的中位数分别为 120 GC/g 和 278 GC/g 消化组织。

图1通过 RT-ddPCR 测定诺如病毒 GI 和 GII 浓度。图源自参考文献

通过 RT-ddPCR 确定用于从贝类中去除游离病毒 RNA 的 RNase 预处理显著降低了可检测诺如病毒 GI 和 GII 浓度的总量。RNase 预处理导致平均降低 37% 和 19%，导致诺如病毒 GI 和 GII 的中位浓度分别为 40 和 149 GC/g（图2）。部分样品从635个减少至80 GC/g消化组织和从437 个减少至43 GC/g消化组织，浓度降低百分比最大。在测试的 20 个贝类样品中，8 个（40%）在未进行 RNase 预处理的情况下，总诺如病毒含量低于 200 GC/g的低病毒浓度污染，RT-qPCR只能对一半的样品进行定量。

图2通过 RT-ddPCR 在与诺如病毒疾病相关的贝类样品中诺如病毒 GI 和 GII 浓度（每克基因组拷贝数（GC/g） 消化组织），有和没有RNase 预处理。图源自参考文献

当进行 RNase 预处理时，水平适度下降（约 50% 降低），表明至少一部分可检测到的诺如病毒来自非感染性病毒。虽然分子检测与衣壳完整性检测结合使用，也不能确定其传染性，但这项研究表明，食用含有低浓度诺如病毒（44-200 GC/g 贝类消化组织）的贝类确实含有传染性诺如病毒，并且含量足以引起诺如病毒疾病。

参考文献：Droplet Digital PCR for Precise Quantification of Human Norovirus in Shellfish Associated with Gastroenteritis Illness