诺如病毒（Norovirus, NoV）是全球急性胃肠炎最常见的病原体之一，与轮状病毒并列为儿童腹泻的重要原因。在多数实施轮状病毒疫苗接种的国家，诺如病毒在急性肠道感染中的比例显著上升，逐渐成为首要致病因素。据世界卫生组织（WHO）2024 年的报告，全球每年约出现7亿例诺如病毒感染病例，导致超20 万人死亡。由于该病毒的高传染性，其防控难度极大。目前尚无任何国家批准上市的诺如病毒疫苗。WHO 已将诺如病毒列入“亟需疫苗研发的优先病原体”名单。

过去三十年中，GII.4 基因型的诺如病毒是全球爆发疫情的主要类型，占比高达 70–80%。因此，GII.4 型 VP1 是研究重点。然而，诺如病毒基因型众多、变异频繁，交叉免疫的机制尚不清楚，导致疫苗设计困难。近期有科研团队在此背景下，开展了对重组 GII.4 VP1 蛋白免疫原性的系统研究。

研究方法

1. VP1 蛋白的制备

研究团队利用原核表达系统表达重组 VP1 蛋白。经纯化和复性后，得到可溶性蛋白，其形成病毒样颗粒（VLPs）的能力已在前期研究中确认。

2. 动物免疫实验

实验选用 8 周龄雌性 BALB/c 小鼠（每组 10 只）。研究分为三组：

· 对照组：注射生理盐水；

· VP1 组：注射 10 μg VP1；

· VP1 +佐剂组：注射 10 μg VP1 加 100 μg 氢氧化铝。

免疫途径为腹腔注射，间隔两周后加强一次，三周后采血。此外对豚鼠另行免疫，以获得供免疫电子显微镜观察用的高效抗体。

3. 抗体检测与分析

研究采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗 VP1 抗体的总水平及 IgM 水平。通过 8 M 尿素洗脱法计算抗体的亲合力指数（Avidity Index），以评估抗体与抗原结合的稳定性。亲合力越高，通常代表中和能力越强。

此外，研究团队还设计了免疫电子显微镜实验，将免疫获得的抗体吸附在电子显微镜网格上，再与含不同诺如病毒基因型（GII.4、GII.7、GII.17、GI.3）或肠道病毒（阴性对照）的粪便样本混合，从而观察是否发生抗原颗粒的特异性结合。

实验结果

1. 抗体滴度显著升高

所有接种组动物的血清中均检测到抗 VP1 抗体，而生理盐水组阴性。IgM 抗体滴度平均为 1:474，添加铝佐剂后提高约2倍； IgG滴度均值 1:1869，部分样本高达 1:8000；在加佐剂组更达到平均 1:13,158，显示佐剂显著增强免疫反应。

从几何平均滴度来看，单独 VP1 接种组为 1:1024，联合佐剂组达到 1:9410，表明 VP1 具备很高的免疫原性。

2. 抗体的特异性与亲合力

竞争性抑制实验表明，当重组 VP1 蛋白浓度超过 4.5×10⁻⁴ mg/mL 时，可中和 95% 的血清抗体反应，说明所得抗体确实针对 VP1 特异性表位产生。

亲合力结果显示，总抗体的亲合力指数为 55.2%；加佐剂后提升至 83.9%；IgM 抗体亲合力明显较低（约 8–9%）。

3. 交叉反应实验

抗 VP1 GII.4 的 IgG 能特异结合 GII.4、GII.7 和 GII.17 基因型诺如病毒颗粒；然而对 GI.3 型（不同属群）及肠道病毒对照无反应。这意味着重组表达的GII.4 VP1免疫获得的抗体不仅识别自身基因型的病毒，也部分识别其他GII群代表株，表现出交叉反应性。这一特点对于广谱型诺如病毒疫苗设计具有重要意义。

结果与讨论

该团队此前通过生物信息学预测，也在 GII.4 Sydney [P16] VP1 中识别出 2 个线性与 47 个构象性 B 细胞表位及若干潜在 T 细胞表位，提示该蛋白可激活全面的体液与细胞免疫反应。

研究观察到早期 IgM 抗体滴度较低、亲合力弱，符合初级应答特征。而 IgG 为主的抗体在二次免疫后显著增强，且亲合力提升。使用铝佐剂后，IgG 水平与亲合力几乎翻倍，说明佐剂在促进体液免疫成熟方面效果显著。这也为未来疫苗配方提供了参考。

目前没有疫苗保护的情况下，自身防护十分关键。尤其针对诺如病毒容易暴发的特点，一旦发现疑似病例，务必对其排泄及呕吐场所彻底消毒，酒精消毒剂对诺如病毒无效，建议使用以下含氯消毒剂进行彻底消毒，以防病毒扩散。

参考资料：

1. Lapin VA, Novikov DV, Kashnikov AY, Epifanova NV, Novikova NA, Mokhonova EV, Melentev DA, Tsyganova MI, Zaitsev DE, Novikov VV. Recombinant VP1 protein of norovirus GII.4 (Caliciviridae: Norovirus) is capable to induse the production of cross-reacting antibodies. Vopr Virusol. 2025, 21;70(3):282-290.