单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）在食品加工环境中常与粪肠球菌（Enterococcus faecalis）形成混合物种生物膜，显著增强了对常规消毒手段的耐受性。为克服单一抗菌剂（如内溶素或植物精油）的局限性，日本九州大学和中国上海交通大学合作研究内溶素LysPEF1-1与肉桂皮精油联用的效果，其成果Application of endolysin LysPEF1-1 with cinnamon bark against planktonicand mixed-species biofilm cells of Listeria monocytogenes and Enterococcus faecalis on various food and food contact surfaces发表于Food Control。

该研究首先在浮游细胞水平上验证LysPEF1-1与肉桂皮精油的协同抗菌效果。研究者采用棋盘法测定两者单用及联用的最低抑菌浓度，计算联合抑菌指数（FICI）；并通过时间-杀菌曲线观察不同温度下的杀菌动态。同时，利用碘化丙啶染色评估细胞膜通透性变化，以揭示协同机制。随后，研究建立单种及混合物种生物膜模型，在不同温度（4、25、37℃）和不同初始接种比例（1:9、1:1、9:1）下培养7天，采用结晶紫染色定量生物膜总量，并用选择性培养基分别计数两种细菌的活菌数，评估混合生物膜的形成特点及优势菌种。最后，在三种实际食品接触表面（聚苯乙烯板、304不锈钢片、卷心菜叶）上培养成熟的混合生物膜，用LysPEF1-1和/或肉桂皮精油处理2小时，通过活菌计数评价各处理对混合生物膜的清除效果，从而全面评估该联合策略的应用潜力。

结果显示，联合处理对多种革兰氏阳性菌及部分革兰氏阴性菌表现出协同杀灭作用，而棋盘法证实两者联用对单增李斯特菌呈协同效应（图1A），且碘化丙啶染色表明联合处理后细胞膜通透性显著增，说明内溶素破坏细胞壁后精油更易攻击细胞膜。时间-杀菌曲线显示，在37℃下联合处理能快速将活菌数降至检测限以下且无恢复生长（图3）。

图1 LysPEF1-1 和肉桂皮精油（C.b.EO）对单核细胞增生李斯特菌 No. 185 生长的抑制

图3 LysPEF1-1和/或C.b.EO对体外单核细胞增生李斯特活力的影响

在巴氏杀菌奶和切片奶酪表面，联合处理也表现出优于单用的抑菌效果（图4、图5）。混合生物膜实验中，1:1接种比例下生物膜形成量最大，且粪肠球菌在生物膜中占绝对优势（图6）。

 图4 在牛奶中的效果

图5 在切片奶酪表面的效果

图6 单核细胞增生李斯特菌和粪肠球菌的生物膜形成

在聚苯乙烯板和不锈钢表面，联合处理能显著减少混合生物膜的活菌数，且在37℃下效果最佳（图7、图8）。在卷心菜叶表面，联合处理同样有效，但受表面结构影响效果略低于光滑表面。综上，该联合策略对浮游细胞和混合生物膜均有良好清除效果，在食品加工环境中有应用前景。

                     图7,图8 对96孔聚苯乙烯板（左）/不锈钢表面上（右）混合生物膜去除效果的影响

参考文献链接：https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2025.111933