SRCA-LFS技术实现肉制品中单核细胞增生李斯特菌快速现场检测

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）是食品安全领域高度关注的食源性致病菌之一，可引发李斯特菌病，对孕妇、新生儿、老年人及免疫力低下人群危害尤为严重，感染后死亡率可达20%~30%。该菌环境适应能力极强，不仅可在低温冷藏条件下生长，还能耐受酸性和高盐环境，因此在肉制品加工、储运和销售环节中具有较高污染风险。

肉制品是单核细胞增生李斯特菌传播的重要载体。从原料处理、生产加工到终端零售，任一环节均可能发生污染，一旦进入即食肉制品或低温肉制品供应链，将对食品企业质量控制和公众健康造成较大威胁。因此，建立快速、灵敏、准确且适合现场应用的检测方法，对肉制品安全监管具有重要意义。

目前，传统平板培养法仍是食源性致病菌检测的“金标准”，结果可靠、准确性高，但检测流程通常包括预增菌、选择性增菌、分离培养和生化鉴定等步骤，整体耗时长达3~5天，难以满足企业现场放行、市场快速抽检和突发污染排查等即时检测需求。PCR技术虽然具有较高灵敏度和特异性，但依赖昂贵的热循环仪器和专业操作人员，在基层监管和资源受限场景中应用受限。

SRCA与侧向流试纸条融合构建快检体系

近期，发表于《Food and Bioprocess Technology》的研究提出了一种新型SRCA-LFS检测方法，将跳跃式滚环扩增技术（Saltatory Rolling Circle Amplification，SRCA）的高灵敏核酸扩增能力，与侧向流试纸条（Lateral Flow Strip，LFS）的可视化读数优势相结合，实现肉制品中单核细胞增生李斯特菌的快速现场检测。

SRCA是一种新型等温核酸扩增技术，反应过程无需复杂温度循环，仅依赖恒温条件即可完成目标核酸扩增。与PCR相比，该方法不需要热循环仪；与LAMP相比，SRCA仅需一对引物，能够降低多引物体系带来的非特异扩增风险；与传统SRCA依赖凝胶电泳判读相比，SRCA-LFS通过试纸条直接显色，显著提升了现场适用性。

该研究以单核细胞增生李斯特菌的高度保守毒力基因hlyA作为检测靶标。实验中，正向引物标记生物素，反向引物标记6-FAM。当样品中存在目标DNA时，SRCA扩增产生同时带有生物素和6-FAM的双标记产物。产物加入试纸条后，生物素端与链霉亲和素标记的红色乳胶纳米颗粒结合，6-FAM端被检测线上的抗FAM抗体捕获，形成肉眼可见的红色T线；质控线C线则显示蓝色信号。阳性样品出现T线和C线，阴性样品仅出现C线。

图1 SRCA-LFS检测单核细胞增生李斯特菌原理示意图^[1]

特异性、灵敏度与稳定性表现优异

研究团队首先对SRCA-LFS方法的可行性进行了验证。结果显示，阳性样品在试纸条上同时出现检测线和质控线，阴性样品仅出现质控线；实时荧光SRCA对照实验也仅在阳性组中观察到明显扩增曲线，证明该体系能够有效识别并扩增目标序列。

在特异性实验中，研究人员选取11株细菌进行验证，包括单核细胞增生李斯特菌，以及西氏李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔斯李斯特菌、格氏李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、志贺氏菌、阪崎克罗诺杆菌和副溶血性弧菌等非目标菌株。结果显示，仅单核细胞增生李斯特菌样品出现阳性T线，其余非目标菌和阴性对照均无交叉反应。实时荧光SRCA结果与试纸条检测结果一致，表明该方法具有良好特异性。在灵敏度方面，SRCA-LFS对单核细胞增生李斯特菌基因组DNA的检测灵敏度达到2.94×10⁰ fg/μL，与实时荧光SRCA相当，较PCR-LFS方法提升100倍。该结果说明，SRCA-LFS在不依赖昂贵荧光检测设备的情况下，仍能保持接近实时荧光检测的高灵敏性能。

研究还进一步评估了方法在肉制品基质中的检出限。经人工污染肉制品样品验证，SRCA-LFS的最低检出限为3.46×10⁰ CFU/mL，与实时荧光SRCA一致，同样比PCR-LFS高100倍。相比部分PCR-LFS、LAMP-LFS或RPA-LFS方法，SRCA-LFS兼具低检出限、反应体系简单、仪器依赖低等优势。此外，研究团队将冻干SRCA试剂和试纸条分别置于4℃和37℃条件下保存一周，并在第0、1、3、5、7天进行检测。结果显示，阳性与阴性结果仍能清晰区分，试纸条显色无明显差异，说明该体系具有较好的短期热稳定性，具备在冷链条件不完善场景下应用的潜力。

40分钟完成检测，性能优于PCR-LFS

该SRCA-LFS方法可在40分钟内完成肉制品中单核细胞增生李斯特菌检测，检测结果可通过肉眼直接读取，无需凝胶电泳、荧光仪或复杂分析设备。整个流程仅需DNA提取、等温扩增和试纸条显色判读，操作门槛较低，适合食品企业、基层监管机构和现场抽检场景。

与传统培养法相比，SRCA-LFS将检测周期由3~5天缩短至40分钟左右，大幅提升了应急检测效率。与PCR方法相比，该方法不依赖热循环仪，仅需简单恒温设备，如水浴锅或便携式加热模块，即可完成扩增。与传统SRCA相比，该方法取消了凝胶电泳步骤，减少了实验室依赖和操作风险。与PCR-LFS相比，其DNA检测灵敏度和肉制品样品检出限均提高100倍。在50份实际肉制品样品检测中，SRCA-LFS共检出9份阳性样品，而国家标准GB4789.30-2025方法检出8份阳性样品。对比结果显示，SRCA-LFS的相对灵敏度为100.00%，相对特异性为97.62%，相对准确率为98.00%。其中1份SRCA-LFS阳性而国标法阴性的样品，可能与样品中存在失活菌或活的不可培养状态细菌有关，也可能源于传统培养法在菌落挑选和操作环节中的漏检风险。

为肉制品现场快检提供新方案

该研究构建的SRCA-LFS方法兼具高灵敏、快速、低成本、操作简便和现场适用性强等特点，为肉制品中单核细胞增生李斯特菌检测提供了新的技术路径。研究估算，该方法单次检测成本约为2.40美元，具备较好的经济性和推广潜力。从应用场景看，SRCA-LFS可用于肉制品加工企业的原料筛查、生产过程监控、成品出厂检测，也可用于市场监管部门的现场抽检和食品安全应急排查。尤其在资源受限地区，该方法无需大型仪器和专业实验室，有助于提升基层食品安全检测能力。

该平台还具有进一步拓展潜力。通过在侧向流试纸条上设计多条检测线，并匹配不同靶标的特异性引物和抗体体系，未来可实现多种食源性致病菌的同步检测，提高现场筛查效率。不过，目前SRCA-LFS仍主要用于定性检测，尚难以直接提供菌量定量信息。未来若与便携式读数仪、智能手机图像分析或人工智能判读系统结合，有望进一步拓展其半定量或定量检测能力

展望

未来，SRCA-LFS技术有望成为食源性致病菌现场快检的重要工具。随着等温扩增体系优化、试纸条多重检测设计、冻干试剂稳定性提升以及便携式智能读数设备的发展，该方法可进一步从单一病原检测拓展至多病原同步筛查，从定性判读升级为定量分析。

在食品安全监管需求不断提升的背景下，SRCA-LFS这类低成本、低设备依赖、快速可视化的检测平台，将有助于缩短检测周期、降低基层检测门槛，并提升肉制品等高风险食品的现场监测能力。未来，该技术不仅可服务于单核细胞增生李斯特菌检测，也可为沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7等其他食源性致病菌的快速检测方法开发提供参考。

参考文献：

[1] Zou W, Yan J, He Q, Cui Y, Bai J, Zhang W, Zhou Q, Yang Q. Harnessing Saltatory Rolling Circle Amplification and Lateral Flow Strip (SRCA-LFS) for Rapid Onsite Detection of Listeria monocytogenes in Meat Products. Food and Bioprocess Technology. 2026;19:131.