诺如病毒(Norovirus，NoV)通过粪-口途径传播，食用被污染的食物，饮用被污染的水都可能导致NoV感染。滤食性贝类通过鳃吸收海水中的微藻来满足生理需求，它们成为细菌和病毒病原体的载体。牡蛎素有“海中牛奶”的美称，其味道鲜美，营养价值高，常生食保留其鲜味，但研究显示全球牡蛎中NoV的污染率达28%，表明目前商业净化程序无法有效清除牡蛎中的NoV。

  去除牡蛎中病原体的一种普遍做法是将牡蛎保存在装有清洁海水的水箱中，这一过程称为净化。该过程已被证明能很好地去除细菌病原体。然而，对于NoV，净化效果较差。这是由于NoV颗粒与牡蛎消化组织中存在的碳水化合物受体结合所致。这些受体与人类肠道中的组织血型抗原(HBGA)非常相似。因此很多研究者致力于探究改变外界因素，达到高效净化牡蛎中诺如病毒的效果。目前在英国，净化牡蛎的最低温度为8°C，但在中国和澳大利亚部分地区，净化水温甚至可以达到25°C。有研究表明，提高水温可以增加细菌的消除效率。因此挪威海产品的研究人员通过控制水温探究了高温是否也有利于病毒的清除。

  试验中低温净化在12±0.9°C的温度下进行，高温净化温度为17±0.2°C。使用净化设施中常规使用的海水。净化在没有水再循环的流通系统中持续28天。试验选择能培养的杜兰病毒(TuV)和NoV共同开展，通过(PMAxx-) RT-qPCR和TCID50两种方式对比病毒的减少量。

  图1 通过RT-qPCR测定的每毫升基因组拷贝中TuV(实线)和NoV(虚线)的RNA浓度(不添加PMAxx(a)，以及TCID50测定的在净化期间高、低水温下每毫升中的TuV滴度(b))

  结果显示(图1)，TuV的RNA比NoV更持久，在14天后下降< 0.5 log10，而此时NoV的下降已经> 1.0 log10。RT-qPCR没有检测到水温升高或加入核酸交联剂PMAxx对两种病毒RNA量的影响(p > 0.05)，在整个4周的试验中，RNA水平保持相对稳定。而TCID50显示TuV滴度随着时间的延长稳步下降，两种温度下的下降差异有统计学意义(p < 0.001)，在第14和21天最为明显，17°C的减量比12°C高1.3-1.7 log10。3周后，在17°C下减少> 3.0 log10，而在12°C下减少不超过1.9 log10。此外，净化时间的长短对病毒数量也有影响。7天后，TuV减少量< 1.0 log10, 4周后减少量增加到> 4.0 log10。以上表明，将净化期延长至7天以上与提高水温相结合，可能有利于病毒病原体灭活和去除。

  此外，该研究发现第一周内NoV RNA的减少幅度最大。在试验剩余时间里，NoV水平相当稳定。推测可能由于未结合的NoV在生物积累后被短暂地从牡蛎中冲洗出来，而结合的病毒在研究的其余时间内仍留在牡蛎中。试验发现PMAxx对这两种病毒RNA检测没有任何影响。然而，与常规RT-qPCR相比，该核酸染料的应用主要在于区分传染性和非传染性细菌、病毒等方面。PMAxx是对DNA具有高亲和力的光反应染料，染料嵌入dsDNA并在强烈的可见光下形成共价键。该反应通过在纯化过程中去除修饰的DNA和抑制DNA聚合酶的模板扩增的组合来抑制修饰的DNA的PCR扩增。之前研究发现由于病毒衣壳损伤会促进PMAxx的进入。在该研究中，TuV和NoV很可能没有暴露在导致严重衣壳损伤的条件下。因此，TCID50的传染性TuV下降，而对RNA没有影响。

  参考文献：

  Stoppel S M , Duinker A , Khatri M ,et al.Temperature Dependent Depuration of Norovirus GII and Tulane Virus from Oysters (Crassostrea gigas)[J].Food and Environmental Virology, 2023, 15(1):43-50.DOI:10.1007/s12560-022-09547-8