小RNA SaaS与肠炎沙门菌的致病性

  沙门菌可导致多种食源性疾病，从轻度自限性胃肠炎到危及生命的全身性感染，据报道，沙门菌每年导致约1.8亿例腹泻，占所有腹泻相关死亡病例的41%。肠炎沙门菌可突破肠道上皮细胞层，在吞噬细胞内复制、传播，最终引起全身性感染，其致病过程依赖于多种毒力因子协同作用。非编码小RNAs (noncoding small RNAs，sRNAs)是一类主要的转录后调控因子，最近被发现并鉴定为调控毒力因子的表达，特别是SPIs中的毒力因子。

  本研究旨在确定SaaS在肠炎沙门菌致病性中的生物学作用及其对细菌毒力的贡献。

  1、研究SaaS sRNA对沙门菌菌株增殖能力的影响;

  2、采用Caco-2和RAW 264.7细胞系分别研究sRNA SaaS对肠炎沙门菌体外侵袭、胞内复制及细胞毒性的影响;

  3、在小鼠感染模型中探索SaaS对细菌体内毒力的影响。

  SaaS是一种模拟肠道环境(SIE)反应性sRNA，可调节毒力基因表达并直接与ssaV相互作用。在SIE或非SIE环境下，野生株(WT)和敲除株(△saaS)的生长模式相似，野生株、敲除株和回补株(△saaS/psaaS)的活细胞计数没有显著差异(P>0.05)。SIE环境下，与WT株相比，△saaS株的毒力相关靶基因invA、prgJ、phoP、ssaV、ssaR和ssaT的mRNA水平显著降低(P<0.05)，spiA、ssaQ和ssaU基因的mRNA表达量显著提高(P<0.05)。

  sRNA SaaS促进肠道屏障功能障碍和细菌免疫逃逸。与WT株相比，△saaS株对RAW 264.7细胞的粘附降低，对Caco-2和RAW 264.7细胞的内化明显减少。在Caco-2和RAW 264.7细胞中，WT株的内化率比△saaS株高约2倍。WT组感染Caco-2细胞的LDH活性均显著高于△saaS组(P<0.05)。

  sRNA SaaS在体内增强肠炎沙门菌的毒力。与感染△saaS株的小鼠相比，WT株感染小鼠的死亡速度更快，存活率约低16%。△saaS组的50%致死剂量(LD50)几乎是WT组和△saaS/psaaS组的8~10倍(WT、△saaS和△saaS/psaaS组分别为1x105，1 x106和1.26x105 CFU)。

  SaaS激活可显著调节肠炎沙门菌在宿主细胞中毒力基因的表达、侵袭和细胞内增殖，表明其在体内具有调节细菌致病性的能力。