吴清平研究团队在单增李斯特菌优势克隆群CC8检测方向取得新进展

近日，广东省科学院微生物研究所吴清平研究团队在《International Journal of Food Microbiology》期刊上发表研究论文，题为“A novel multiplex PCR based method for the detection of Listeria monocytogenes clonal complex 8”。该研究系统开发并验证了一种可同时鉴定单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）及其优势克隆群CC8的多重PCR及高分辨率熔解曲线（HRM）qPCR方法，为食品中该致病菌的快速筛查与精准溯源提供了可靠技术支撑。论文第一作者为程健恒硕士研究生，通讯作者为院士和陈谋通研究员。

CC8型单增李斯特菌是国内外食品与临床样品中广泛流行的优势克隆群，其引发的李斯特菌病死亡率高达20%–30%。传统MLST分型依赖测序，周期长、成本高，难以满足日常监测需求。如何在不牺牲准确性的前提下实现CC8株的快速、低成本检测，是当前食品安全领域亟待解决的技术瓶颈。

针对上述难题，研究团队依托4 098株单增李斯特菌全基因组数据，通过泛基因组分析锁定CC8特异性基因LM5578_1180及种特异基因LM5578_2262，设计并优化多重PCR与HRM qPCR引物体系。方法学验证表明，该体系在85株单增李斯特菌（含14株CC8）及26株非单增李斯特菌中表现出100%特异性；对纯培养物的检测下限分别为2.1×10³ CFU/mL（mPCR）与2.1×10⁰ CFU/mL（HRM qPCR）。在干扰菌（CC9、CC87、CC121、CC155及L. innocua）比例高达8:1时，仍能稳定检出CC8目标条带与熔解峰，显示出优异的抗干扰能力。

图1：基于qPCR的单增李斯特菌CC8克隆株多重PCR敏感性研究

人工污染烤猪肉实验进一步证实，mPCR可在6.2×10³ CFU/mL水平、6 h富集后检出CC8；HRM qPCR仅需3 h富集即可在6.2×10⁴ CFU/mL水平实现阳性判读。对12份市售食用菌的实际检测结果显示，两种方法与国标GB 4789.30–2016完全一致，9 h内即可完成CC8鉴定，而传统MLST流程需5–6天，成本降低90%以上。

图2：多重PCR检测人工污染烤猪肉中单增李斯特菌CC8

该研究首次从泛基因组大数据挖掘—分子标记筛选—多重PCR/HRM qPCR验证的完整技术链，实现了单增李斯特菌CC8克隆群的快速、精准、低成本检测，为食品生产加工环节中长期潜伏的CC8风险株监测与精准消毒提供了新工具，对提升我国食品安全保障能力具有重要意义。

本研究得到国家自然科学基金（32222068、32072326）、广东省基础与应用基础研究重大项目（2022B1515020068）及广东省科学院科技发展专项（2021GDASYL-20210103012）等项目资助。

相关论文信息：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168160523003926?via%3Dihub