葡萄籽提取物抗诺如病毒作用机制研究

  诺如病毒(Norovirus，NoV)是病毒性胃肠炎的主要病因，对乙醇、氯己定等常用消毒剂不敏感。日本学者利用NoV常用替代病毒猫杯状病毒(Feline calicivirus，FCV)灭活试验在63种天然提取物中，筛选发现14种具有高FCV灭活作用的天然提取物。然后对其中作用效果较好的葡萄籽提取物的抗病毒机制进行了进一步研究。

  首先，为了确定葡萄籽提取物对NoV病毒样颗粒(研究中选择GII.4型NoV，后简称GII.4 VLPs)与受体结合抑制作用的时间依赖性，用0.02% w/v的葡萄籽提取物作用5 ~ 30min，当作用时间为10 min时，抑制率明显高于作用时间为5 min时，说明葡萄籽提取物对GII.4 VLPs的结合抑制作用具有时间依赖性。而作用10 min与作用30 min抑制率差异无统计学意义(p > 0.05)(图1)。

  图 1葡萄籽提取物对病毒样颗粒结合抑制作用的时间依赖性研究

  为了证实葡萄籽提取物对GII.4 VLPs结合抑制作用的浓度依赖性，用0.01 ~ 0.04% w/v 葡萄籽提取物处理GII.4 VLPs 30 min, 0.02% 葡萄籽提取物的抑制作用明显高于0.01% ，说明葡萄籽提取物的抑制作用具有浓度依赖性。0.02% 葡萄籽提取物的抑制率为87.5%，与0.04%的抑制率相近(p > 0.05)(图2)。

  图 2葡萄籽提取物对病毒样颗粒结合抑制作用的浓度依赖性

  同时，研究通过透射电镜观察了0.01 ~ 0.04% w/v 葡萄籽提取物处理GII.4 VLPs后病毒样颗粒的形态，图5可见葡萄籽提取物处理的GII.4 VLPs与PBS缓冲液相比轮廓模糊，出现肿胀和聚集现象。这些明显的变化以葡萄籽提取物浓度依赖性的方式增加。

  图 3葡萄籽提取物处理后病毒样颗粒的透射电镜图像(A PBS处理的GII.4 VLPs;B 0.01% w/v 葡萄籽提取物处理;C 0.02% w/v 葡萄籽提取物处理;D 0.04% w/v 葡萄籽提取物处理。VLPs，病毒样颗粒)

  此外，研究还测定了在葡萄籽提取物各浓度处理条件下，200个GII.4 VLPs的平均粒径。结果葡萄籽提取物处理的GII.4 VLPs的粒径同样以浓度依赖的方式显著增加(图6)。

  图 4葡萄籽提取物处理后病毒样颗粒粒径变化

  该研究首先通过NoV替代病毒筛选到具有抗病毒活性的天然提取物，然后利用NoV病毒样颗粒与受体结合抑制试验和病毒样颗粒形态变化进行抗病毒作用机制的研究。随着NoV斑马鱼培养体系的建立，后续在该体系基础上开展的抗病毒研究将更具说服力。

  参考文献：

  Nishitani K, Morita T, Seto Y. Screening of natural extracts with anti-norovirus effects and analysis of this mechanism in grape seed extract. J Microorg Control. 2023;28(3):83-92. doi: 10.4265/jmc.28.3_83.