双歧杆菌培养基的分类

  双歧杆菌的分离培养除了要创造适合于它们生长的厌氧环境条件外，还需要提供适于它们生长的培养基。许多培养基由人们设计用于分离培养和计数自然生境中的双歧杆菌，培养基可分为非选择性和选择性的。

  1.非选择性培养基

  有不少通常为厌氧菌设计的培养基也适用于双歧杆菌的培养，如脑心浸液琼脂(BHI)、VL培养基、布氏血琼脂、Eugon琼脂、加富梭菌琼脂培养基，还有含番茄汁的蛋白琼脂等培养基。使用的基质包括有各种蛋白陈，脑、心、肝等动物组织浸液，酵母提取物(浸膏或粉剂)，葡萄糖，可溶性淀粉，番茄汁和无机盐等，还有降低培养基氧化还原电位的还原剂，如维生素C、巯基乙酸钠、半胱氨酸或半胱氨酸·HCI、Na2S，新鲜的动物的某些器官组织(如脑、心肝的浸液)和葡萄糖等都可降低培养基的氧化还原电位，但现在最常用的是半胱氨酸或半胱氨酸·HCI。葡萄糖不仅作为还原剂，它也是作为培养基中的营养组分而加入的。此外还有氧化还原指示剂，现常用的指示剂为刃天青。几乎所有的培养基中都含有蛋白陈，只是类型或商品名不同而已。有的使用培养基是某些现成的已知复合培养基或在其上加以改进的。从人类、牛的瘤胃和蜜蜂肠道来源的双歧杆菌，最初试验是将它们穿刺培养，维持其生长基质的蛋白陈是胰酶解酪朊和植质蛋白陈(Trypticase和Phytone BBL)，后来被采用。称之为TPY的培养基其中即含有此二种蛋白陈。TPY培养基广泛应用于今为止的所有生境来源的双歧杆菌属内不同种菌株的分离和培养。但TPY培养基是非选择性的，链球菌、乳杆菌和其他类型菌都可能在其上生长增殖，因此分离时在其上生长的菌落需进一步鉴定。

  2.选择性培养基

  为了选择性的分离双歧杆菌，设计了不少培养基。选择培养基中除含有双歧杆菌的营养基质外，还添加有不同含量的抗菌素或其他制菌剂，如硫酸卡那霉素(75μg /mL)、硫酸新霉素(30～200)μg/mL、硫酸巴龙霉素(20～200)μg /mL、萘啶酸(15μg /mL或80μg/mL)、氯化锂(3mg/mL)、丙酸钠(10g/L或15g/L)、山梨酸(0.4g/L)等，这些选择性基质主要是抑制大肠杆菌的生长。关于在一些培养基中所使用浓度的选择效果，对而言知之仍甚少。选择基质的效果取决于下列因素：①试验材料中的优势细菌种群;②双歧杆菌的数量;③使用的选择基质的种类和浓度，选择基质混合使用可能附加的效果;④培养的技术条件;⑤培养基的类型：最适生长培养基或最低营养培养基。此外双歧杆菌本身对抗菌素的抗性在种间和种内还具有较大差异。鉴于上述一些因素，目前已提出的养基似乎尚无一种是完全有选择性的，这些培养基也不能使双歧杆菌所有的种在其上长。能让大多数已知的双歧杆菌类型生长良好的基质是目前较好的选择。