真皮是位于毛囊基部的一簇间充质细胞，在调节头发生长方面具有许多重要作用。因此，这些细胞的体外模型被广泛用于研究毛囊诱导，生长和维持的分子机制。虽然啮齿动物毛囊中的真皮可以在细胞分离之前被消化，但在人真皮中发现的独特的细胞外基质组成使胰蛋白酶和胶原酶等酶不足以将真皮消化成单细胞悬浮液。因此，为了在体外培养人真皮细胞，必须首先通过从卵泡中微解剖方法分离。在本文中，我们描述了我们在实验室中使用的微解剖和培养方法，用于研究人类真皮细胞。

  在雄激素源性脱发中，毛囊会经历微小化的过程，在此期间其毛干变小，毛干大小的减少与真皮大小的减少相结合，在雄激素源性脱发中，卵泡也可能“卡住”在休止期，无法重新进入生长期。虽然已知小型化毛囊中的毛囊干细胞转化为干细胞祖细胞的能力降低，但尚不清楚这是否是由于缺乏来自真皮的信号传导，或者这些细胞无法响应来自真皮的信号。然而，鉴于真皮在生长期启动和维持中的重要性，许多研究小组已经使用真皮的体内，离体和体外模型来阐明其中控制头发生长的关键信号。这包括对真皮的转录组分析，以及评估真皮在调节头发周期，头发发育和头发类型规格中的作用的模型。

  有报道称，从大鼠和豚鼠等物种中微解剖的完整真皮能够在移植后诱导受体上皮中的新毛发和毛囊生长。后来，使用利用显微解剖方法的类似方法分离和培养人真皮细胞。然而，虽然完全完整的人可以诱导新的毛发生长，但从这些真皮培养的细胞与啮齿动物的对应物明显不同，并且很快就会失去它们的诱导能力。人真皮细胞在培养物中失去了诱导新毛发生长的能力。我们之前证明，在悬挂滴剂中生长人真皮细胞可以促进真皮球状体的形成，其形态上类似于完整的。这种强制聚集可以部分恢复其诱导记忆，并且在3D球体中生长的人真皮细胞可以诱导新的头发生长。在本文中，我们提供了有关倒置显微解剖技术的详细方法，我们在实验室内使用该技术从生长期的人类头皮毛囊中分离真皮细胞，以及一些有关如何避免常见陷阱的提示。除此之外，我们还详细介绍了真皮3D球体形成的方法。以前，低结合板或具有合成膜的板已被用于产生真皮球体;然而，在这里我们描述了我们在实验室中使用的悬挂滴方法。

  虽然皮肤和毛囊可能是人体中最容易接近的组织，当然与其他内部组织和器官相比，真皮在毛囊内的位置会使通过微解剖分离变得困难和耗时。人真皮分离和3D球体培养技术可以解决这一难题。真皮是毛囊中不可或缺的组成部分，在头发生长中起着至关重要的诱导作用。这些细胞的分离和培养可能是艰巨而耗时的，并且在培养中发生戏剧性的转录变化，降低了我们深入了解在头发生长中的作用和体外模型循环的能力。在体外在3D球状体结构中培养细胞可以为头发研究提供有用的工具，并有望帮助发现头发生长的新治疗靶点。