内毒素，有称为脂多糖复合(LPS，lipopolysaccharide)，广泛存在于大多数革兰氏阴性细菌。类脂A为LPS的主要发挥热原活性的主要部分，其可诱导强烈的免疫反应，如严重的发烧，脓毒性休克等，每年造成大量人员伤亡。CD14是一种55kDa的LPS结合糖蛋白，是LPS介导的细胞活化和内毒素解毒的关键成分。LPS转运到CD14是由LPS结合蛋白(LBP)介导的，固定在细胞膜上的CD14形成LPS/LBP/CD14复合物，刺激单核细胞产生和分泌促炎细胞因子，包括TNFa和IL-6，引起强烈的热原反应。然而，可溶性游离的CD14可抑制LPS的全人血细胞中TNFa的分泌，其可通过竞争性抑制或阻断LPS与细胞膜上的CD14结合，从而降低热原反应的危害。

  图1 LPS-生物素滴度CD14)[1]

  (正方形为未包埋CD14，三角形为包埋CD14)

  图2 S39抗CD14mAb(方块，ng /well)在对1：80的LPS–生物素的的解离[1]

  Burkhardt等[1]人利用游离的CD14对LPS具有高亲和力这一特性，开发了一种基于CD14为识别分子的、带有发光标记的LPS与样品中LPS竞争性结合的电化学发光内毒素检测方法。CD14被动固定在碳表面上，随后使用LPS-生物素滴度包埋在碳表面的CD14，然后接受钌–链霉亲和素，获得最佳滴度比为1：80，RLU=50000。信噪比>40。带有发光标记的LPS与样品中LPS竞争性结合抑制其发光，其检测限为8 ng/mL。

  图3 未带标签LPS(ng/ml)，CD14先接收未标记的LPS，随后是生物素化的LPS和钌–链霉亲和素。抑制率表示为样品中未标记的LPS[1]

  References:

  [1]. Burkhardt, M., et al., Purification of soluble CD14 fusion proteins and use in an electrochemiluminescent assay for lipopolysaccharide binding. Protein Expression and Purification, 2007. 51(1): p. 96-101.