鲤疱疹病毒Ⅱ型抗体胶体金检测试纸条的制备和分析

鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus-2, CyHV-2)是鲫的疱疹病毒性造血坏死病原体，其抗体目前尚无成熟的检测手段。胶体金免疫层析试纸条技术将胶体金标记技术、免疫检测技术、层析分析技术和单(多)克隆抗体技术等多种技术相结合，具有特异性高、反应迅速、操作简单、成本低等特点，适用于水产养殖临床检测。本研究开发了一种适用于检测CyHV-2抗体的胶体金免疫层析试纸条，具有灵敏度和特异性高、操作简单和成本较低等特点，对鱼类检疫、鱼体抗体水平评价等具有实际应用价值。

摘要

【背景】由鲤疱疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus-2, CyHV-2)引起的疱疹病毒性造血坏死病在鲫和金鱼中的暴发给水产养殖业造成了巨大的经济损失。【目的】开发一种快速、现场检测鲫是否感染过CyHV-2和监测鲫CyHV-2 IgM抗体水平的胶体金检测试纸条。【方法】将CyHV-2与胶体金结合作为金标抗原、Protein A作为检测线、兔源rORF66多克隆抗体进行划线作为质控线，分析胶体金试纸条最佳制备及组装条件，确定胶体金标记最适pH、金标抗原最适浓度，以及检测线(test line, T线)、质控线(control line, C线)最适划线浓度等。【结果】本研究制备的CyHV-2抗体胶体金试纸条可以使用全血测试，与常见的其他鱼类抗体血清无交叉反应，如草鱼呼肠孤病毒抗体阳性血清、鳜虹彩病毒抗体阳性血清等。试纸条最低限度可以检测到1:100稀释的阳性血清抗体，由试纸条检测线的深浅可以初步判断鱼体中抗体水平。试纸条通过对10条鲫鱼血清样品检测并和金鱼造血器官坏死病毒检测方法(GB/T 36194—2018)进行Kappa分析，Kappa值为0.80，表明二者有较高的符合率。【结论】本研究制备的试纸条具有较高的灵敏度和特异性，具有操作简单和成本较低的特点，对鱼类检疫、鱼体抗体水平评价等具有实际应用价值。

图1  胶体金试纸条结构图

图2  系列稀释的鲫鱼抗体阳性血清Dot-blot检测分析

图3  胶体金颗粒的质量鉴定

图4  鲤疱疹病毒II型抗体胶体金试纸条特异性检验结果   1：鲤疱疹病毒II型阳性血清；2：草鱼呼肠孤病毒阳性血清；3：鳜虹彩病毒阳性血清；4：大口黑鲈虹彩病毒阳性血清；5：鲤春病毒血症病毒阳性血清

图5  鲤疱疹病毒II型抗体胶体金试纸条灵敏性检验结果