共磁珠富集和MALDI-TOF质谱法快速鉴定血液培养物中的细菌
基质辅助激光解析离子飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)由于其简单性、高通量性以及对细菌、真菌和酵母等的扩展鉴定能力而被广泛引入临床微生物实验室。基于MALDI-TOF MS的细菌指纹由生物分子组成,特别是细菌核糖体蛋白。然而,血培养瓶中含有多种非细菌蛋白质,这些蛋白质会干扰MALDI-TOF MS对细菌的鉴定。目前对样品前处理的方法主要涉及三个步骤:溶解血细胞、离心或过滤,以及洗涤步骤。然而,使用这些方法进行细菌鉴定的成功率并不令人满意,特别是对于革兰氏阳性细菌。血液和培养液中的一些蛋白质的存在可能降低质谱鉴定的灵敏度。
为了解决这一问题,作者探讨了使用磁珠(MBs)富集细菌的策略。磁珠具有去除复杂基质干扰、保持细菌活性的优势,而结合曼诺糖结合凝集素(MBL)和IgG的磁珠可提高细菌富集效率。
在这项研究中,对比了FcMBL@Fe3O4、IgG@Fe3O4和Fc-MBL@Fe3O4与IgG@Fe3O4耦合在水溶液和血培养瓶中的细菌富集效率。FcMBL@Fe3O4在水溶液中的细菌富集效率优于IgG@Fe3O4.然而,在血培养瓶中,单独使用Fc-MBL@Fe3O4的富集效率下降,因为受到其中化学物质的干扰。单独使用Fc-MBL@Fe3O4或IgG@Fe3O4对所有革兰阳性和革兰阴性细菌的效果并不理想。FcMBL@Fe3O4与IgG@Fe3O4的合作克服了单独使用时的缺点。通过共磁性珠,可以有效地从血液培养中富集革兰阳性或革兰阴性细菌,提高了MALDI-TOF MS的鉴定准确性。
总之,作者开发了一种利用共磁性珠快速鉴定血液培养中细菌的方法。该策略缩短了整体鉴定时间,提高了鉴定准确性,显示出在复杂临床样本中富集和鉴定未知细菌的巨大潜力。
原文doi:10.1016/j.talanta.2021.122472
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