用肉眼即可诊断食品样本中呕吐型蜡样芽孢杆菌的核酸检测平台？

　　背景：催吐蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus，B. cereus)是广义B. cereus，负责分泌催吐毒素催吐素，催吐素是一种化学性质稳定的小环肽。因此，一旦进入食物链，就很难根除。催吐素可引起呕吐性食物中毒，在某些情况下甚至是致命的。此外，它还与糖尿病和肝功能衰竭有关。以大米、面食和土豆为基础的膳食是主要的食物污染源。B. cereus检测定量聚合酶链反应(qPCR)和其他方法，如基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱和脉冲场凝胶电泳，依赖于昂贵和笨重的仪器，不能快速获得结果。上述缺点可以通过使用等温扩增技术如环介导等温扩增(LAMP)来避免。然而，LAMP复杂的引物设计导致假阳性率较高，限制了其在呕吐物的现场检测中的应用。B. cereus的催吐素引起的食物中毒。近年来B. cereus的发病频繁，因此，呕吐性B. cereus的肉眼诊断平台是一个通用的。

　　工作内容：这项工作提供了一种通用的呕吐性B. cereus的肉眼诊断平台。基于重组酶聚合酶扩增(RPA)辅助的CRISPR/Cas12a通过靶向催泪素合成酶生物合成基因(cesB)开发。该诊断平台通过分别在管的底部和盖处添加组件来实现一锅检测。RPA-CRISPR/Cas12 a对呕吐性B. cereus的gDNA和细胞的视觉检测限分别为10−2 ng/μL和102 CFU/mL。同时，即使通过简单煮沸提取gDNA，它在大米，牛奶和熟肉样品中也保持了相同的灵敏度。整个检测过程可在40 min内完成，并可检测到呕吐性B. cereus的单细胞。

　　Fig. 1. RPA-CRISPR/Cas 12 a检测cesB示意图

　　Fig. 2. 通过RPA-CRISPR/Cas 12 a检测人工污染的大米(A)、牛奶(B)和熟肉(C)样品。最后一个图像中的字母a、B和c分别对应于面板A、B和C。数字1 - 9分别代表1.6 × 108、1.6 × 107、1.6 × 106、1.6 × 105、1.6 × 104、1.6 × 103、1.6 × 102、1.6 × 101和1.6 × 100 CFU/g的浓度。编号10为零加标样品，编号11为空白对照。