麻疹病毒快速检测新方法： RT - RPA结合CRISPR/Cas12a与侧流检测

一、研究背景

麻疹是一种由麻疹病毒引起的具有高度传染性的疾病，严重威胁着人类健康，尤其是儿童。传统的麻疹病毒检测方法存在一些局限性，如检测时间较长、操作复杂等。在这种背景下，新的检测技术的探索成为了医学研究领域的重要课题。

二、RT - RPA结合CRISPR/Cas12a与侧流检测技术原理

（一）RT - RPA技术

逆转录酶/重组酶聚合酶扩增（RT - RPA）是一种核酸扩增技术。它能够在恒温条件下快速地对RNA进行扩增。这种特性使得它相较于传统的聚合酶链反应（PCR）技术更为便捷，不需要复杂的温度循环设备，大大缩短了检测的准备时间。

（二）CRISPR/Cas12a系统

CRISPR/Cas12a是一种基因编辑技术中的重要组成部分。在麻疹病毒检测中，Cas12a蛋白在向导RNA的引导下，能够特异性地识别并结合到经RT - RPA扩增后的麻疹病毒核酸序列上。一旦结合，Cas12a蛋白会被激活，产生一种非特异性的切割活性。

（三）侧流检测

侧流检测是一种简单、快速的检测方法。被激活的Cas12a蛋白切割的产物可以与侧流检测试纸条上的标记物相互作用。如果样本中存在麻疹病毒，在试纸条上会出现特定的条带，从而直观地显示检测结果。

图1 侧向流检测试验示意图。(A)未裂解的报告分子在第一条检测线（控制线）被捕获并显示阴性结果。(B) Cas12切割活性在第二条检测线（测试线）产生补充信号，表明结果为阳性。红色箭头表示流的方向。

三、研究过程与结果

在麻疹暴发的背景下，快速的病毒学诊断对于适当的医疗护理和控制传播具有重要意义。近期，在Diagnostics杂志上发表的一篇题为“Rapid Detection of Measles Virus Using Reverse Transcriptase/Recombinase Polymerase Amplification Coupled with CRISPR/Cas12a and a Lateral Flow Detection: A Proof-of-Concept Study”的研究论文，作者结合了逆转录酶、RPA等温扩增、CRISPR/Cas12a生物传感和裸眼可视化相关的免疫层析条带建立了一种逆转录酶/重组酶聚合酶扩增方法。

RT-RPA- CRISPR-LFD检测的灵敏度达到了6.25拷贝/µL RNA，与灵敏度为120拷贝/µL RNA的RT-RPA外显荧光检测相比，大幅提高约19倍。

对27份麻疹病毒RT-PCR阳性样本和29份麻疹病毒阴性唾液样本进行了诊断性能评估。灵敏度和特异性分别为96% （95% CI, 81-99%）和100% (95% CI, 88-100%)，对应的准确率为98% (95% CI, 94-100%；p & lt;0.0001)。

四、研究意义与展望

（一）临床意义

在临床上，这种快速检测方法能够使医生更快地对患者进行诊断，及时采取相应的治疗措施。对于麻疹这种具有较强传染性的疾病，早期诊断有助于减少病毒传播给他人的风险，保护易感人群。

（二）公共卫生意义

在公共卫生领域，该检测技术有助于快速监测麻疹疫情的发生和发展。在麻疹疫情爆发时，可以快速对大量的疑似病例进行筛查，从而有效地控制疫情的蔓延。

（三）未来展望

虽然这种新的检测方法在麻疹病毒检测方面取得了很好的成果，但仍有进一步完善的空间。例如，可以进一步优化检测试剂的配方，提高检测的灵敏度；或者研究如何将这种检测方法整合到现有的医疗检测体系中，使其更加便捷地应用于基层医疗机构。

总之，这项关于利用RT - RPA结合CRISPR/Cas12a与侧流检测麻疹病毒的概念验证研究为麻疹病毒的快速检测提供了一种新的、很有潜力的方法，有望在未来的麻疹防控工作中发挥重要作用。

参考文献：

Pinchon E, Henry S, Leon F, et al. Rapid Detection of Measles Virus Using Reverse Transcriptase/Recombinase Polymerase Amplification Coupled with CRISPR/Cas12a and a Lateral Flow Detection: A Proof-of-Concept Study[J]. Diagnostics, 2024, 14(5): 517.