仿生磁性病毒样纳米酶 LFA 技术:30 分钟同步检测 3 种胃肠道病原体,检测限低至 4 CFU/mL
胃肠道病原体引发的感染性胃肠炎是全球第二大常见传染病,世界卫生组织数据显示,全球每天数百万人感染,每年累计病例达 10 亿例,超 200 万人因此死亡。精准识别病原体对临床治疗、流行病学调查及疾病防控至关重要,但现有检测技术存在明显短板:传统细菌培养需 1-2 天,PCR 检测耗时 2-3 小时且成本高达 10-100 美元,常规侧向流免疫分析(LFA)虽适合现场检测,却因胶体金等标记物灵敏度不足(检测限多为 10⁴ CFU/mL),难以检出低浓度早期感染,且复杂样本(如粪便)易导致假阳性或假阴性,这些痛点推动着高灵敏、快速检测技术的研发。
南方医科大学、广东省人民医院与华南理工大学联合团队,受冠状病毒刺突蛋白结构启发,设计合成了仿生磁性病毒样纳米酶(Fe-Pt₂₀-Au@Pt₅),并构建了基于该纳米酶的多重 LFA 平台(Fe-Pt₂₀-Au@Pt₅-LFA),可同步检测幽门螺杆菌、鼠伤寒沙门氏菌与大肠杆菌 O157:H7 三种关键胃肠道病原体。该纳米酶从内到外呈三层结构:160 nm 的 Fe₃O₄磁核提供强磁响应性与基础过氧化物酶活性,中间层 20 nm 海胆状 Pt 纳米颗粒强化比色与催化性能,最外层 5 nm Au@Pt 卫星颗粒模拟病毒刺突尖端结构,不仅大幅提升细菌捕获面积,还构建大量 3D 催化位点,实现 “磁富集 - 协同增强 - 多催化位点” 三重信号放大。
图 1:通过 TEM、HRTEM、EDS 等技术表征 Fe-Pt₂₀-Au@Pt₅纳米酶的三层结构、元素分布及强磁性,验证该仿生磁性病毒样纳米酶成功制备。
检测时,抗体功能化的 Fe-Pt₂₀-Au@Pt₅纳米酶与样本混合,通过抗原 - 抗体结合捕获目标病原体,经外部磁场快速富集后重悬,滴加至含三条检测线(对应三种病原体)与一条质控线的 LFA 试纸条;若存在目标病原体,纳米酶 - 细菌复合物会被检测线抗体捕获,加入 AEC/H₂O₂底物后,纳米酶快速生成红色不溶性沉淀放大信号,整个过程 30 分钟内即可完成。
图 2:以 XPS、UV-Vis 光谱等证实 Fe-Pt₂₀-Au@Pt₅纳米酶的元素组成,其催化活性、稳定性及底物亲和力均优于单一纳米材料。
图 3:SEM 图像、平板培养结果及 LFA 试纸条检测显示,Fe-Pt₂₀-Au@Pt₅纳米酶对三种胃肠道病原体捕获效率超 92%,且 LFA 无交叉反应。
性能验证显示,该平台对三种病原体的检测限分别低至 4 CFU/mL(幽门螺杆菌)、5 CFU/mL(鼠伤寒沙门氏菌)、9 CFU/mL(大肠杆菌 O157:H7),较传统 AuNP-LFA 灵敏度提升 1111-2500 倍,动态检测范围覆盖 10-10⁵ CFU/mL,相关系数(R²)均超 0.965,批间重复性良好(相对标准偏差 RSD<11.87%)。在复杂样本检测中,该技术表现稳定:对湖水、河水及临床粪便样本,通过磁富集有效抑制基质干扰,目标病原体加标回收率达 81.01%-116.85%;139 例临床粪便样本(71 例幽门螺杆菌阳性、12 例鼠伤寒沙门氏菌阳性、56 例阴性)检测结果与实时荧光定量 PCR(qPCR)完全一致,灵敏度与特异性均达 100%(AUC=1.00),且检测时间从 qPCR 的 2-4 小时缩短至 30 分钟内,成本仅为核酸检测的 1/5。
图 4:LFA 试纸条照片及标准曲线表明,催化反应后该平台对三种病原体的检测限降至 4-9 CFU/mL,灵敏度较传统 AuNP-LFA 大幅提升。
图 5:实际样本(河水、粪便)检测及临床验证结果显示,该 LFA 技术对目标病原体的回收率为 81.01%-116.85%,与 qPCR 检测结果 100% 一致。
该技术无需复杂样本预处理与大型仪器,仅凭视觉即可初步判断结果,适合基层医疗机构、社区卫生服务中心及胃肠道疾病暴发时的快速筛查,还可通过更换抗体拓展至其他病原体检测。研究获国家重点研发计划、国家自然科学基金等项目支持,为胃肠道病原体现场精准检测提供了全新工具,未来有望在公共卫生防控、基层医疗诊断等场景发挥重要作用,助力降低感染性胃肠炎的发病率与死亡率。
参考文献:Wang B, Li J, Ai J, et al. Biomimetic Magnetic Virus-like Nanozyme-Mediated Lateral Flow Immunoassay for Direct and Accurate Detection of Gastrointestinal Pathogens[J]. Sensors and Actuators B: Chemical, 2025: 138654.
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