金黄色葡萄球菌是乳制品中一种重要的食源性病原体，因原料或不当食品处理而受到污染。金黄色葡萄球菌的高灵敏度快速检测对食品质量和安全具有重要意义。本研究开发了一种检测牛奶中金黄色葡萄球菌的新方法，将免疫磁分离与赖氨酸plyV12的酶连接细胞壁结合域(CBD)偶联，该酶可以与金黄色葡萄菌高亲和力结合。金黄色葡萄球菌的细胞表面存在数百万个用于CBD附着的结合位点，这大大提高了检测灵敏度。该方法在加标牛奶中的总检测时间仅为1.5h，检测限为4×103 CFU/mL。该方法简便、快速、灵敏，可用于各种食品样品中金黄色葡萄球菌的检测。。

  免疫分析，如酶联免疫吸附试验(ELISA)，常用来检测金黄色葡萄球菌相关蛋白或毒素，然而，目前尚无ELISA方法检测金黄色葡萄球菌本身，这可能是因为99%的金黄色葡萄球菌分离株表面存在葡萄球菌A蛋白 (SPA)。SPA已成为凝集试验中金黄色葡萄球菌检测的标记物，而凝集试验仅适用于检测高浓度细菌。

  用ELISA检测金黄色葡萄球菌，主要的问题是寻找合适的抗体对和满足检测食品中少量细菌的敏感性要求。利用IgG抗体与SPA结合捕获细菌是可能的，但检测的第二抗体也会与IgG捕获抗体竞争与SPA结合，从而释放捕获的细菌，降低敏感性。因此，寻找两种抗体中的一种替代抗体对提高ELISA的敏感性至关重要。

  噬菌体内溶素(Lysins)是噬菌体裂解周期后期合成的一类细菌细胞壁多肽聚糖水解酶，介导宿主细胞的裂解和子代噬菌体的释放。Lysins通常包含两个模块结构域:N-端催化结构域和C-末端细胞壁结合域(CBD) 。大多数溶菌素的CBDs负责将水解酶通过碳水化合物配体的非共价结合附着到细菌细胞壁的特定底物上。Lysin plyV12的CBD plyV12C可以与金黄色葡萄球菌高亲和力结合

  图1 用于金黄色葡萄球菌检测的基于CBD的磁富集免疫分析示意图。

  将该系统应用于PBS中金黄色葡萄球菌的定量检测。以大肠杆菌O157:H7作为阴性对照。检测了金黄色葡萄球菌的浓度从4.8×102 CFU/mL- 106 CFU/mL。金黄色葡萄球菌的OD450nm与CFU之间存在良好的线性关系。为评价系统的检测稳定性，共检测了11组相同浓度的金黄色葡萄球菌(1.5~104CFU/mL)，波动系数为4.5%，证明了检测系统具有良好的重复性。

  为测试该系统是否适用于实际样品中金黄色葡萄球菌的检测，在灭菌牛奶中加入不同浓度的金黄色葡萄球菌制成加标样品。检测牛奶中金黄色葡萄球菌的浓度梯度与PBS相同。标定曲线线性良好，变异系数在9.37%以内。用同样的方法检测PBS中金黄色葡萄球菌，在100 μL牛奶中金黄色葡萄球菌的检出限为400 CFU，与PBS中相同。这些结果表明，牛奶对检测系统几乎没有影响，显示了该系统在真实牛奶样品中检测金黄色葡萄球菌的潜力。

  参考文献：Yu J, Zhang Y, Zhang Y, Li H, Yang H, Wei H. Sensitive and rapid detection of staphylococcus aureus in milk via cell binding domain of lysin. Biosens Bioelectron. 2016 Mar 15;77:366-71.