研究背景

猪急性腹泻综合征冠状病毒SADS-CoV 仅致 5 日龄内仔猪腹泻，大龄猪无症状，安全性高且遗传可塑性强，适合作为病毒载体。而 PEDV 危害极大，2 周龄内仔猪感染死亡率达 95%-100%，2010 年高致病性 GII 亚型出现后，传统 GI 亚型疫苗失效，现有疫苗存黏膜免疫弱或毒力返强等问题，PEDV 防控急需新方案。本研究据此探索 SADS-CoV 作为 PEDV 疫苗载体的可行性。

关键突破

重组病毒构建与减毒验证

通过 Gibson 组装将 SADS-CoV 基因组克隆至 BAC 载体，经 Red 重组技术构建 NS3a 基因缺失减毒株 rSADS-DNS3a，及 4 株插入 PEDV（COE+S1D）抗原与靶向肽的重组病毒（图 1）。

动物实验显示，rSADS-DNS3a 感染仔猪小肠病变较野生型更轻微，回肠绒毛损伤减轻，肠道病毒抗原更少（图 2），证实 NS3a 缺失实现减毒，保障载体安全性。

重组病毒生物学特性优异

4 株重组病毒在 Vero 细胞增殖趋势与野生型一致，48 小时达滴度峰值；在 IPI-2I 细胞前期增殖略慢，但整体稳定（图 3B、C）。传代 20 代后，PCR 及测序证实外源基因稳定保留无突变，Western blot 与 IFA 检测到 PEDV 抗原蛋白正常表达（图 3A、D、E），证明其遗传稳定且表达能力良好。

免疫原性与被动保护效果显著

重组病毒经后海穴免疫妊娠母猪，含靶向肽的重组病毒组（如 rSADS-DNS3a-PEDV (COE+S1D)-Co1）CD11c+DC 占比达 44.95%，显著高于灭活疫苗组（30.9%），CD3+CD4+、CD3+CD8+T 细胞比例也更高（图 4B-E），有效激活细胞免疫。免疫母猪与仔猪血清中 PEDV 特异性 IgG 显著升高，部分仔猪检出 IgA（图 4F-I），母源抗体传递有效。

PEDV 攻毒实验中，免疫组仔猪腹泻评分低于灭活疫苗组，双靶向肽组最低；免疫组存活率 100%（除 1 头个体虚弱死亡），高于阳性对照组（75%）（图 5B、C）。剖检显示免疫组仔猪小肠无明显病变，双靶向肽组空肠病毒载量较阳性对照组显著下降（p<0.01），肠道绒毛完整、PEDV 抗原少（图 5D、E、图 6），保护效力充分验证。

结论与展望

研究成功开发以减毒 SADS-CoV 为载体的 PEDV 疫苗，NS3a 缺失确保安全，外源基因稳定表达且增殖良好，免疫母猪可诱导全面免疫，为仔猪提供强效被动保护，双靶向肽设计提升效果，同时建立 SADS-CoV 反向遗传平台，为猪源病毒载体疫苗提供技术路径。

未来可优化接种途径增强黏膜免疫，开发多价疫苗表达多种病原抗原，开展大规模田间试验验证持久性与安全性，推动产业化应用，助力生猪腹泻疾病防控。

参考文献：

YAN X L, ZHANG X L, LYU X C, et al. Recombinant SADS-CoV as a vector for porcine epidemic diarrhea vaccine development[J]. Frontiers in Immunology, 2025, 16: 1633661.