用于从鸡中高效分离副鸡禽杆菌的选择性培养基的研发

一、研究背景与意义

疾病危害：

鸡传染性鼻炎（IC） 由副鸡禽杆菌（AvP，原称副鸡嗜血杆菌） 引起，临床症状为流鼻涕、面部肿胀、流泪等，可导致蛋鸡产蛋量骤降，给家禽养殖业造成重大经济损失；该病全球分布，2018 年后美国中西部（如俄亥俄州、印第安纳州）首次暴发，波及约 2500 万只蛋鸡，且可感染雉鸡、鹌鹑等其他禽鸟，存在跨种群传播风险。

现有技术瓶颈：

AvP 为苛养菌，多数菌株需NAD（或 NADH） 才能生长，传统培养需添加分泌 V 因子（NAD）的辅助菌（如表皮葡萄球菌、猪葡萄球菌），依赖 “卫星生长” 现象，操作复杂；

鸡上呼吸道存在大量共生菌，易在培养中过度繁殖，导致 AvP 分离纯度低、效率差；

传统培养基（如含 5% 羊血的血琼脂、巧克力琼脂）分离率不足，且无法分离近年发现的非致病性 AvP（npAvP），制约 IC 诊断与疫苗研发。

研究目标：开发无需辅助菌、可抑制背景菌、高效分离 AvP 的选择性培养基。

二、研究结果

（1）培养基性能核心数据

AvP 生长效率：

MSN broth 中 AvP 在 12h 进入对数期，24h CFU 比 TSA broth 高 1 个数量级（TSA 中 AvP 进入稳定期后快速死亡）；

MSNV/MSCV 上 AvP 菌落尺寸为 2-5mm，远大于传统巧克力琼脂（0.5-1mm，露珠状），便于观察。

非致病性 AvP（npAvP）分离：从 153 个 “无 IC 症状 + RT-PCR 阳性” 样本中，MSNV/MSCV 成功分离出4 株 npAvP，传统方法未分离到任何 npAvP；npAvP 基因组特征为无荚膜、HMTp210 血凝素基因长度是致病性 AvP 的 3 倍。

背景菌抑制效果：MSNV/MSCV 大幅减少革兰氏阳性背景菌污染，其中 MSCV 可通过菌落颜色区分 AvP（浅紫色）与其他菌（黄色），进一步提升纯化效率；传统巧克力琼脂背景菌过度生长，部分样本中 AvP 菌落不可见。

三、核心突破：

首次开发出无需辅助菌的 AvP 选择性培养基（MSNV/MSCV），解决传统方法依赖辅助菌的痛点；分离率较传统方法提升21.7%-27.7%，且能分离 npAvP，填补技术空白。

应用价值：

诊断：缩短 IC 报告时间（从 4 天至 2 天），助力快速防控；研发：支持 AvP 纯培养，为抗菌药敏试验、全基因组分析、自体疫苗及通用疫苗开发提供材料；延伸：MSNV/MSCV 可支持巴斯德氏菌科多数病原菌（如多杀巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌）生长，为其他动物病原菌分离提供参考。

局限性：MSNV 无法支持副猪嗜血杆菌生长，需根据目标菌选择培养基（MSCV 可支持）。

参考文献：Srednik M E, Shelkamy M M S, Hashish A, et al. Development of selective culture media for efficient isolation of Avibacterium paragallinarum from chickens[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2025, 63(8): e00311-25.