诊断与预防并举：基于非洲猪瘟病毒非结构蛋白的双功能平台助力猪场疫病防控

自2018年非洲猪瘟（ASF）首次闯入中国以来，这一对家猪和野猪近乎“一击致命”的烈性传染病，便成为悬在我国养猪业头上的达摩克利斯之剑。尽管行业在生物安全防控上投入了巨大成本，但一个残酷的现实始终未变：全球尚无一款被广泛认可的安全、有效且具有广谱保护力的商业化ASF疫苗。面对不断突变、甚至出现基因型间重组的ASFV，我们迫切需要跳出传统思维，寻找新的防控突破口。

中国农业科学院上海兽医研究所的团队不仅成功建立了一种基于ASFV非结构蛋白的高灵敏度血清学检测方法，更创新性地利用猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的弱毒活疫苗作为“卡车”，递送ASFV的保护性抗原，初步实现了“打一针，防两病”的活载体疫苗构想。

另辟蹊径：为何选择pI215L和pI73R？

长期以来，ASFV疫苗研发多聚焦于p30、p72等结构蛋白，但效果不尽如人意。这项研究却将目光投向了两个非结构蛋白-pI215L（泛素结合酶） 和pI73R（Z-DNA结合蛋白）。这二者不仅是ASFV复制和致病的关键“帮凶”，更具备极强的免疫调节功能。pI215L能抑制宿主I型干扰素信号，而pI73R则能阻碍宿主mRNA出核，从而关闭宿主细胞的蛋白合成。更重要的是，它们能诱导产生早期且持续的中和抗体，且其抗原表位丰富、亲水性好，既是理想的诊断靶标，也是极具潜力的疫苗抗原。采用双抗原（pI215L+pI73R）联用策略，理论上可覆盖ASFV感染的早、中阶段，避免单一抗原可能导致的免疫逃逸。

诊断突破：98.48%符合率的双抗原iELISA

在诊断层面，研究者利用原核表达系统高效制备了重组pI215L和pI73R蛋白，并以此为基础建立了一种间接ELISA（iELISA）检测方法。通过系统优化抗原包被浓度（4 μg/mL）、血清稀释度（1:100）及反应条件，该方法的特异性表现出色-与猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒2型（PCV2）等常见猪病原阳性血清均无交叉反应；其敏感性可达1:1600倍稀释。在与商品化ASFV抗体检测试剂盒（ID.VET）进行132份临床血清的平行比对中，该iELISA的符合率高达98.48%（仅2份结果不一致），为缺乏便捷检测手段的基层养殖场提供了一个成本可控、操作简便的新选择。

图1 表达质粒与重组蛋白的构建与纯化

核心利器：以PRRSV为“卡车”的活载体二价疫苗构想

如果说诊断方法只是“前菜”，那么利用PRRSV活病毒载体递送ASFV抗原则是一道“硬菜”。研究团队巧妙利用了实验室已有的PRRSV弱毒疫苗骨架（vHuN4-F112）-该骨架本身安全稳定，已被证实可容纳外源基因。研究者将ASFV的I215L和I73R基因精准插入PRRSV基因组的ORF1b和ORF2a之间，成功抢救出两株重组活病毒：rPRRSV-I215L和rPRRSV-I73R。

令人欣慰的是，这两株重组病毒在MARC-145细胞上的生长动力学、噬斑形态均与其母本弱毒株高度一致，且在连续传代25代后，外源基因依然稳定存在，未发生突变或缺失-这意味着该载体平台具备工业化生产所需的遗传稳定性。

动物试验：安全且能唤起双重免疫应答

研究团队进一步选取抗原表达更强的rPRRSV-I215L进行了仔猪免疫试验。结果令人振奋：

安全性良好：免疫仔猪在35天观察期内无发热、无生长迟缓、无病毒血症，组织病理学检查也未见任何病变，表明该重组病毒对靶动物安全无致病力。

成功唤起双抗体应答：在免疫后第21天，仔猪体内不仅检测到了针对PRRSV N蛋白的抗体，更重要的是，通过本文所建立的iELISA检测，也明确检测到了针对ASFV pI215L的特异性抗体。这意味着，该重组病毒在猪体内成功表达了外源ASFV抗原，并激起了特异性体液免疫。

细胞免疫有响应：细胞因子监测显示，免疫组仔猪的IL-4、IL-8、TNF-α在7天起显著升高，而IFN-γ在第3天就出现了早期应答，预示着Th1型细胞免疫的激活。

图2 rPRRSV-I215L疫苗接种血清中细胞因子水平的检测

结语：从“概念验证”到“田间应用”仍有长路

这项研究的精巧之处在于实现了“诊断+疫苗”两条腿走路。它在全球ASF疫苗研发屡屡受挫的背景下，提供了一种新颖的“借船出海”策略-利用PRRSV这一养猪业“老对手”的弱毒活疫苗平台，来递送ASFV的“新抗原”，并展示了可靠的血清学检测工具。

当然，也必须清醒地看到，目前该研究尚处于概念验证（proof-of-concept） 阶段。仅检测到特异性抗体，并不等同于能抵抗致死性ASFV攻毒。rPRRSV载体是否会在田间与野毒株发生重组，是否会因免疫抑制而产生抗体依赖性增强（ADE）效应，仍需要大规模攻毒保护试验和长期生物安全评价来验证。

尽管如此，这项研究仍为陷入僵局的ASF防控带来了两点重要启示：第一，非结构蛋白可能是比结构蛋白更值得挖掘的抗原宝库；第二，“一针多防”的联苗策略在猪用疫苗上是可行的。 期待该团队的后续攻毒数据，能让这缕“曙光”照进现实的猪圈。

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参考资料：

Luo, M., Shuai, W., Guo, Z., Li, J., Li, L., Zhou, Y., Jiang, Y., Zeng, Y., Wang, J., & Gao, F. (2026). Indirect ELISA for African swine fever virus serological detection and recombinant porcine reproductive and respiratory syndrome virus-based bivalent vaccine. International Journal of Biological Macromolecules, *342*, 150314. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2026.150314