灵芝活性成分协同抗炎研究新发现：为炎症性疾病治疗带来新契机

炎症与多种疾病相关，巨噬细胞在炎症反应中起关键作用，其被脂多糖（LPS）刺激后会释放炎症介质引发疾病。天然活性成分，像多糖、多酚和萜类化合物，因其潜在的抗炎功效和较低的副作用，受到了广泛关注。其中，灵芝作为一种传统的食药同源真菌，富含多种生物活性成分，在调节免疫、抗肿瘤、抗炎等方面展现出良好的效果。灵芝多糖（ Ganoderma lucidum polysaccharide，GLP）和灵芝三萜类化合物（Ganoderma lucidum triterpenoids，GLT）已被证实具有抗炎特性，然而，以往研究多聚焦于单一成分，对于灵芝中不同活性成分的协同抗炎作用研究较少。

近日，浙江工业大学食品科学与工程学院杨凯老师研究团队在《International Journal of Biological Macromolecules》杂志发表题为“Synergistic anti-inffammatory effects of Ganoderma lucidum polysaccharide and ganoderic acid A on LPS-induced RAW264.7 cells by inhibition of TLR4/NF-κB activation”的研究论文，揭示了灵芝多糖（GLP-1）和灵芝酸 A（GAA）在 RAW264.7 细胞中的协同抗炎机制，为天然产物抗炎应用提供了新方向。

一、  灵芝多糖的分离与鉴定

研究团队从灵芝粉末中，经过一系列复杂的步骤，包括乙醇浸泡去除杂质、水提、不同浓度乙醇沉淀、透析和冷冻干燥等，得到灵芝粗多糖，再通过DEAE色谱柱进一步分离，获得不同的多糖组分，最终选定GLP-1进行深入研究（图1）。接着，运用多种技术手段，对GLP-1的结构进行全面表征（图2）。其总糖含量为 81.93 ± 4.61%，蛋白质含量仅 0.16 ± 0.04%，分子量约 3.035kDa，主要由葡萄糖组成，还含有少量其他单糖，属于中性多糖。其主链由→3)-β-D-Glcp-(1→和→4)-β-D-Glcp-(1→交替连接而成，侧链则由→3)-β-D-Glcp-(1→和→6)-β -D-Glcp-(1→构成，并且具有三重螺旋结构，这种结构与抗炎活性密切相关。

图1 灵芝多糖分离工艺

图2 GLP-1结构表征

注：（A）分子量; （B）单糖组成（1: 岩藻糖；2: 鼠李糖；3: 阿拉伯糖；4: 半乳糖；5: 葡萄糖；6: 木糖；7: 甘露糖；8: 果糖；9: 核糖；10: 半乳糖醛酸；11: 古洛糖醛酸；12: 葡萄糖醛酸；13: 甘露糖醛酸）; （C）UV; （D）FT-IR; （E）刚果红; （F）SEM

图3 GLP-1的推测结构

二、GLP-1与GAA的协同抗炎作用

在协同抗炎效果上，GLP-1和GAA在一定浓度范围内对RAW264.7 细胞无明显细胞毒性，GLP-1 在较高浓度时还能促进细胞增殖（图4）。二者组合对脂多糖（LPS）诱导的一氧化氮（NO）产生具有显著的抑制作用，通过 SynergyFinder PLUS 软件分析发现，当GAA与GLP-1质量浓度比为1:4时，协同作用最强（图5）。在细胞因子调节方面，组合处理能有效降低LPS诱导的TNF-α、IL-6、IL-1β等促炎细胞因子的分泌，同时显著提高抗炎细胞因子IL-10的水平（图6）。在ROS清除和线粒体保护上，组合处理表现出色，能够有效减少细胞内ROS生成，更好地恢复被LPS破坏的线粒体膜电位，减轻线粒体和细胞核损伤（图7、图8）。在机制研究层面，RT-qPCR和Western blot结果表明，GLP-1和GAA可能共同作用于 TLR4/NF - κB信号通路，抑制炎症相关基因和蛋白的表达，从而发挥协同抗炎作用（图9、图10）。

图4 GLP-和GAA对RAW264.7细胞活力的影响

注： (A) GLP-1; (B) GAA.

图5 GLP-1、GAA和人血清白蛋白（HSA）模型对一氧化氮的联合抑制作用

注：(A) GLP-1与GAA联合对一氧化氮（NO）的抑制率。(B) 和 (C) 分别是人类血清白蛋白（HSA）模型评分的热图和三维图。

图6 不同组对细胞因子产生的影响

注： (A) TNF-α；(B) IL-1β；(C) IL-6；(D) IL-10

图7 不同组对活性氧生成和线粒体膜电位的影响

注：(A) 经荧光染色后，RAW264.7细胞内的活性氧通过图像展示。(B) 不同组中活性氧的荧光强度。

图8 RAW264.7细胞的细胞形态及荧光强度

注：（A）图像显示的荧光染色后RAW264.7细胞的细胞形态，其中蓝色（Hoechst 33342）和绿色（罗丹明123）分别代表细胞核和线粒体。（B）不同组中罗丹明123的平均荧光强度。

图9 LSP诱导不同组RAW264.7细胞的mRNA水平的影响

注： (A) TNF-α. (B) IL-1β. (C) IL-6. (D) TLR4. (E) NF-κB

图10 不同组对LPS诱导的RAW264.7细胞中TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平的影响

注：(A) 代表性的蛋白质免疫印迹图像。(B - D) TLR4、NF-κB p65和IκBα的蛋白质表达水平。

综上所述，从灵芝中成功分离出具有特定结构的中性多糖GLP-1，与GAA组合在减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症反应方面效果显著，二者通过共同作用于TLR4/NF - κB信号通路，对炎症细胞因子和NO进行免疫调节，同时协同清除ROS，恢复线粒体膜电位。这一发现为灵芝活性成分的协同应用提供了重要的理论依据，为开发新型灵芝抗炎产品奠定了基础。

原文献链接：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2025.143074