鲍曼不动杆菌双重荧光定量PCR检测新方法问世：精准快速助力临床感染防控

研究背景

鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）是临床常见的非发酵革兰阴性杆菌，可引发尿路感染、血流感染、脑膜炎等多种感染性疾病。近年来，随着抗生素的广泛使用，该菌耐药性日益增强，2017年被世界卫生组织列为对人类健康威胁最大的耐药菌之一，碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌更是位居榜首。

传统检测方法依赖微生物培养和生化鉴定，耗时较长且灵敏度有限，难以满足临床早期诊断需求。实时荧光定量PCR虽已成为分子诊断的重要工具，但单一靶标检测易受菌株基因多样性影响，可能出现假阴性结果。因此，开发一种同时检测多个保守靶标的快速、精准检测方法，对提升鲍曼不动杆菌防控水平具有重要意义。

主要发现

1. 泛基因组分析筛选核心靶标

研究团队对150株鲍曼不动杆菌全基因组进行泛基因组分析，发现其基因组大小在4~4.5 Mb之间，共得到1576个核心基因。通过序列保守性与特异性比对，最终筛选出pbp2（青霉素结合蛋白基因）和abc（ATP结合盒转运蛋白基因）两个高度保守且特异的靶标基因，序列相似性均≥97%，为双重检测奠定了基础。

2. 双重荧光定量PCR体系建立

针对两个靶标基因设计特异性引物与TaqMan探针，优化反应体系与条件，成功构建双重荧光定量PCR方法。该体系可在单一反应管中同时扩增两个靶标基因，通过不同荧光信号区分检测结果，避免了单管单靶标检测的局限性。

3. 方法学性能验证

- 灵敏度：对pbp2和abc基因标准质粒的最低检测限分别为4.32×10¹ copies/μL和3.59×10¹ copies/μL；对纯培养物的检测限为1.68×10⁰ CFU/mL（pbp2）和1.68×10¹ CFU/mL（abc）。

- 特异性：对14种常见非鲍曼不动杆菌菌株检测均为阴性，无交叉反应。

- 重复性：组内与组间变异系数均小于3%，表明方法稳定性良好。

结论

本研究基于泛基因组分析筛选出鲍曼不动杆菌的两个核心保守靶标，建立的TaqMan探针双重荧光定量PCR方法，实现了对该菌的快速、高通量、高灵敏度检测。与单一靶标检测相比，双重检测显著降低了假阴性概率，为临床早期诊断鲍曼不动杆菌感染、及时实施抗感染治疗、遏制耐药菌传播提供了可靠技术手段，同时也为其他耐药菌的分子检测方法开发提供了新思路。

未来，该方法有望进一步应用于临床样本检测，助力医院感染防控和公共卫生应急处置，为应对多重耐药菌挑战贡献力量。

参考文献：

[1]于洁，孙志宏，张家超，等. 16S rDNA-RFLP 技术快速鉴定发酵乳中常见乳酸菌 [J]. 食品科学，2015, 36 (20): 185-190.