无血清悬浮LMH细胞新突破！禽腺病毒4型疫苗生产迎来升级平台

禽腺病毒4型（FAdV‑4）诱发的心包积水‑肝炎综合征，长期给家禽养殖业带来巨大经济损失。当前主流灭活疫苗大多依靠贴壁LMH细胞、转瓶/细胞工厂模式生产，人工成本高、批次差异大，还存在血清带来的外源污染风险。如何搭建稳定、高效的无血清悬浮生产平台，是禽兽用疫苗行业的重点攻关方向。近日，《Poultry Science》刊发国内团队研究成果，研究人员将传统贴壁LMH细胞驯化得到两株无血清悬浮细胞株LMH‑MB与LMH‑ME，可用于FAdV‑4灭活疫苗高效制备，同时对多种禽源病毒具备良好的增殖能力，为禽用疫苗工业化提供新的细胞平台。

研究怎么做：贴壁细胞向无血清悬浮驯化

研究人员以贴壁LMH‑TB细胞为出发细胞，采用两种不同无血清培养基组合进行逐步驯化：LMH‑MB：SF003 / Celer‑S101S按体积1:1配比；LMH‑ME：SF003/50% Tac‑S101S按体积1:1配比

通过逐步降低血清比例、持续传代筛选，历经多代驯化后，两株悬浮细胞在35‑62代区间生长性能稳定，细胞活率长期维持高位，完成悬浮细胞建系。分子检测发现：悬浮细胞的柯萨奇‑腺病毒受体CAR表达量显著高于原始贴壁细胞，CAR是FAdV‑4入侵细胞关键受体，受体上调直接提升病毒感染复制效率。

核心试验数据，看得见的工艺优势

1.病毒滴度大幅提升

同等接毒条件下，FAdV‑4在悬浮LMH‑MB、LMH‑ME的产出滴度，是传统贴壁LMH‑TB 的10倍。LMH‑MB对病毒更敏感，被选为疫苗开发首选细胞株。

2.工艺参数完成系统优化

团队对接毒细胞密度、MOI、收获时间、培养温度、细胞代次逐一摸索，确定最优条件：接毒细胞密度3×10⁶ cells/mL，MOI=0.15，37℃培养，接毒后48 h收获病毒。在最优条件下FAdV‑4滴度接近10⁸ TCID₅₀。

3.动物攻毒保护效果优异

将收获病毒经0.1%甲醛灭活，制备油乳灭活疫苗免疫SPF鸡。结果显示，合适免疫剂量下，免疫鸡可实现100%抵御强毒FAdV‑4 攻击，无发病、无死亡，中和抗体水平理想。

4.平台通用性强，不止FAdV‑4

LMH‑MB 悬浮细胞还可高效增殖禽呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、H9N2禽流感、新型鹅星状病毒，具备开发多品类禽用疫苗的潜力。

行业启示：产业化落地要关注这些坑

悬浮驯化门槛高：不同无血清培养基配方对驯化成败影响极大，不能直接照搬文献配比，企业需要结合自有培养基开展POC验证；

锁定细胞工作库代次：高代次细胞存在生长性能漂移风险，生产需严格限定细胞使用代次范围；

生物反应器放大适配：论文参数为参考基线，搅拌、溶氧、pH需要结合企业自身硬件设备重新调试；

注册合规前置：推进申报前，必须完成完整细胞库检定、宿主残留DNA、蛋白等安全性质量研究，满足兽药GMP申报要求。

参考文献：Zhang H, et al. Acclimation of suspension LMH cell line for high‑efficient inactivated FAdV‑4 vaccine production[J]. Poultry Science, 2025. DOI:10.1016/j.psj.2025.105424