融合抗原新候选！鸡球虫EtAMA1‑EtSAG13重组亚单位疫苗免疫保护评价

鸡球虫病是危害家禽产业的重要原虫病，其中柔嫩艾美耳球虫致病性最强，每年给全球家禽业造成巨大经济损失。长期依赖抗球虫药物带来严重耐药性问题；活虫疫苗存在毒力返强、虫体散毒、生产成本高等短板。重组亚单位疫苗凭借安全性高、稳定性好、适合规模化生产的优势，成为球虫防控重要研发方向。单一抗原保护效果有限，多抗原融合是提升保护力的主流思路。近期《Poultry Science》刊发山西农业大学团队研究，选取虫体入侵关键蛋白EtAMA1（顶膜抗原1）与EtSAG13（表面抗原 13），构建单抗原与双抗原融合重组亚单位疫苗，系统评价免疫攻毒保护效果，为鸡柔嫩艾美耳球虫亚单位疫苗研发提供候选材料。

抗原构建与动物免疫攻毒

研究去除EtAMA1、EtSAG13信号肽与跨膜结构域，基因序列优化后，构建pET‑28a (+) 原核表达载体，获得3种重组蛋白：rEtAMA1、rEtSAG13、rEtAMA1‑SAG13融合蛋白。

动物试验分组设置8组SPF鸡，设置空白对照组、攻毒对照组；免疫组设置50 μg、100 μg两个剂量，采用ISA 71 VG佐剂，14日龄首免、21日龄二免；28日龄除空白组外全部口服攻毒5×10⁴个柔嫩艾美耳球虫卵囊。检测指标：增重、盲肠病变记分、卵囊排出量，计算抗球虫指数 ACI；检测血清IgG、IgY抗体以及IL‑2、IL‑6、IL‑17、IFN‑γ细胞因子；结合盲肠组织病理切片评估损伤程度。

核心试验结果

1. 抗原验证：3种重组蛋白均可被柔嫩艾美耳球虫阳性鸡血清识别，具备良好抗原性与免疫反应性。

2. 保护效力对比：单抗原组具备一定保护，但整体效果有限；50 μg rEtAMA1‑SAG13融合抗原组效果最优，ACI=175.48，达到中等抗球虫效力；相对增重89.48%，卵囊减少率79.36%，盲肠组织损伤显著最轻。同等融合抗原提升至 100 μg 剂量，保护效果反而下降。

3.免疫应答：rEtAMA1‑SAG13（50 μg）组血清特异性IgG、IgY以及多种Th1/Th2型细胞因子水平显著升高，同时激活体液免疫与细胞免疫。ACI评价标准：ACI＜120无效；120‑160低效；160‑180中等；≥180高效

行业启示：产业化落地要关注这些坑

双抗原融合优于单一抗原，但并非剂量越高保护效果越好，本试验50 μg优于100 μg，亚单位疫苗需要精准摸索最优免疫剂量。本研究为原核表达产物，原核系统缺少蛋白糖基化修饰，后续需要评估真核表达体系是否可以进一步提升保护效力。仅SPF动物笼养攻毒数据，距离田间复杂多虫株混合感染场景还有差距，还需要开展肉鸡地面笼养中试评价。亚单位疫苗佐剂、免疫途径可以进一步优化；后续需要完成工艺放大、稳定性、安全性全套研究，支撑兽药申报。

参考文献：Zhu S,et al. Evaluation of Immune Protective Efficacy of Recombinant Subunit Vaccines Based on Eimeria tenella EtAMA1 and EtSAG13[J]. Poultry Science,2026. DOI:10.1016/j.psj.2026.107597