攻克细胞基质流感疫苗质控痛点：同源抗原‑抗血清匹配显著提升 SRID 效价检测准确度

近日，SK bioscience 与韩国天主教大学的联合研究团队在《Vaccine》发表研究成果，针对细胞培养流感疫苗的效力评价难题，建立细胞源菠萝蛋白酶裂解血凝素（BHA）制备工艺，证实抗原、抗血清来源同源匹配，是保障单径向免疫扩散法（SRID）检测结果准确的关键条件，为下一代细胞基质流感疫苗标准化质控提供技术方案。

SRID 是全球流感疫苗效价测定的金标准方法，通过检测血凝素（HA）含量判定疫苗有效抗原水平，该方法高度依赖高纯度抗原参考品与毒株特异性抗血清试剂PMC。传统标准试剂大多来源于鸡胚培养系统，但流感病毒在鸡胚传代过程中易产生鸡胚适应性突变，造成血凝素受体结合区域氨基酸改变，抗原性偏离人间流行野生毒株，不仅会降低疫苗实际保护效果，还会直接干扰 SRID 定量结果，带来检测偏差风险。

随着细胞基质流感疫苗产业快速发展，MDCK 悬浮细胞培养体系可大幅减少病毒适应性突变，抗原更贴近临床流行毒株。但与之配套的细胞源 SRID 参考试剂十分匮乏，直接沿用鸡胚来源抗原‑抗血清组合检测细胞源疫苗，会带来定量不准的现实挑战中国食品药。

本研究选取 A/H3N2（A/Texas/50/2012）、B/Victoria 谱系（B/Brisbane/60/2008）两大代表性毒株，摒弃传统一步酶解工艺，开发分步顺序酶解制备 BHA的全新策略： 针对 A/H3N2 毒株，先低温、高浓度菠萝蛋白酶去除神经氨酸酶（NA）杂质，再切换高温、低酶浓度条件释放目标 BHA 蛋白；针对 B/Victoria 谱系毒株，采用胰蛋白酶预处理去除 NA，再进行菠萝蛋白酶裂解提取 BHA.经过响应面法、全因子实验设计多维度工艺优化，A/H3N2 的 BHA 纯度约 95%，B/Victoria 谱系 BHA 纯度约 90%；实验室规模即可获得足够抗原产量用于抗血清制备，A/H3N2 回收率 2.7%、B/Victoria 谱系回收率 7.2%，无需鸡胚大规模生产，可稳定获得低 NA 污染的高纯度 BHA 原料。研究人员使用自制细胞源高纯度 BHA 免疫绵羊，成功获得株特异性强的抗血清；同时完成冻干抗原参考品配方筛选，确定 0.8% 海藻糖作为最优冻干保护剂，制备的冻干参考品 2‑8℃条件下可稳定保存 12 个月，满足标准物质长期储存需求。

交叉 SRID 比对实验显示，检测细胞培养来源流感样品时，细胞源抗原搭配细胞源抗血清的同源组合得到的 HA 定量数值最接近真实水平；鸡胚来源与细胞来源的抗原‑抗血清交叉配对，均出现不同程度检测偏移，其中 A/H3N2 亚型偏差尤为突出。测序分析证实，鸡胚与细胞源 H3N2 毒株在血凝素受体结合域存在氨基酸替换，改变抗原‑抗体相互作用，是造成 SRID 读数失真的分子根源；B/Victoria 谱系毒株该区域序列差异较小，交叉检测偏差相对更小，但同源配对依旧表现最优检测性能。

该研究也指出当前局限：本次仅验证 H3N2、B/Victoria 两类毒株，H1N1、禽流感大流行毒株还需要进一步验证这套工艺普适性。未来可和 NIBSC 等 WHO 合作中心开展协作，推动这套细胞源抗原、抗血清成为国际官方参考标准，完善全球细胞基质流感疫苗质控体系。同时，ELISA 等新型效价检测方法也有望作为 SRID 的补充乃至替代技术，值得持续推进验证评估。

业内表示，该研究解决了细胞基质流感疫苗质控的现实痛点，提示监管与生产端需要重视参考试剂基质来源匹配问题，为全球细胞流感疫苗的标准化放行、质量一致性评价提供重要实验依据。

来源：10.1016/j.vaccine.2026.128235