突破 RHDV2 体外培养瓶颈：细胞源灭活疫苗候选物可实现攻毒完全保护

澳大利亚联邦科学与工业研究组织（CSIRO）团队在《Vaccine》发表短讯研究，依托新型兔肝脏源细胞培养体系，首次研制兔出血症病毒 2 型（RHDV2，GI.2 基因型）细胞培养灭活实验疫苗，动物攻毒试验全部存活，为摆脱传统 “兔体肝脏制备疫苗” 模式提供重要实证，解决该疫病疫苗生产长期面临的动物伦理与产能制约难题。

兔出血症病毒（RHDV）属于杯状病毒科兔病毒属，RHDV2 当前是澳大利亚家兔、野兔群体中流行的优势毒株，发病后致死率极高，家兔与宠物兔必须依靠疫苗实现防护。目前澳大利亚商业化的 RHDV 灭活疫苗均依靠感染实验兔后采集病变肝脏组织，从动物脏器中纯化病毒再灭活制备；该工艺成本高昂，消耗大量实验动物，存在显著动物福利与伦理争议。重组亚单位、VLP 病毒样颗粒疫苗虽无需活病毒与实验动物，但依赖复杂的昆虫细胞表达系统，毒株发生变异时，快速更新疫苗制剂存在一定阻力。

自 1984 年该病毒被发现以来，RHDV 长期无法在体外细胞系稳定高效增殖，细胞源灭活疫苗始终难以实现。该团队此前建立的兔肝脏来源细胞培养体系，搭配 JAK 抑制剂鲁索替尼抑制干扰素应答，可支持 RHDV1、RHDV2 实现高滴度体外复制，为本研究奠定技术基础。

本研究中，研究人员将 RHDV2（GI.2）接种兔肝脏源单层细胞，收获细胞上清，经甲醛两步灭活后，搭配 Montanide ISA 201 VG 油佐剂制备实验性灭活全病毒疫苗。动物试验共纳入 15 只无兔病毒抗体的新西兰白兔，分为三组：PBS 阴性对照组 3 只、市售商品化疫苗 Filavac™组 6 只、自研细胞源实验疫苗组 6 只；免疫 9 天后采用口服途径进行 RHDV2 强毒攻毒，模拟自然感染路径，持续 14 天观察动物存活、体温、体重变化，检测血清抗体与肝脏病毒载量。

试验结果显示：商品化疫苗组与细胞源实验疫苗组全部兔子攻毒后均存活至试验终点 14 天，无死亡；PBS 对照组全部在攻毒后 42‑50 小时内达到人道终点死亡。细胞源疫苗组仅 1 例注射部位结痂、1 例一过性体温升高，不良反应轻微且均可自行恢复，安全性表现良好。

肝脏病毒 RNA 检测提示，免疫组动物肝脏病毒载量显著低于对照组。该结果证实，体外细胞培养获得的灭活全病毒抗原，能够为家兔提供针对 RHDV2 的有效保护。

研究人员指出，本研究属于小样本先导性试点研究，仍然存在局限：仅完成基础保护力验证，尚未开展全面工艺放大、稳定性、不同剂量梯度评价。后续还需要评估该细胞培养平台对 RHDV1 以及变异流行毒株的适配能力。

若该技术进一步成熟落地，将彻底改变 RHD 疫苗的生产逻辑：不再依赖活体兔感染获取病毒原材料，既规避动物伦理问题，全病毒灭活疫苗也具备抗原谱广的优势，当田间出现新变异毒株时，可更快完成毒株驯化与疫苗更新，为养兔产业与野兔生物防控提供全新技术选项。

来源：10.1016/j.vaccine.2026.129067