从样品到酵母菌：富集、筛选与鉴定为什么需要分步进行？

水果表皮、发酵食品、植物组织及环境样品中常存在酵母菌，但同时也伴随大量细菌、霉菌及其他微生物。对于数量较少或处于竞争劣势的酵母菌，如果直接进行平板分离，可能由于初始菌量低或杂菌快速生长而被遗漏。因此，一个较完整的酵母菌筛选流程通常可以概括为：样品处理 → 富集培养 → 选择性分离 → 单菌落挑取 → 纯化培养 → 初步鉴定 → 进一步确认

第一步：先富集，让低丰度酵母菌“长出来”

对于水果表皮、土壤、植物残体及发酵环境等复杂样品，部分酵母菌的初始数量较低，直接涂布可能难以形成可观察菌落。因此，可首先利用适宜的液体培养基进行增菌，提高酵母菌在样品中的相对数量。环凯021101 YPD液体培养基用于酵母菌的增菌培养。培养基能够为酵母菌提供较为丰富的营养物质，可用于样品中酵母菌的前期培养。此外，环凯021120 麦芽汁培养基同样可用于酵母菌的增菌培养，可根据样品来源及实验目的进行选择。需要注意的是，富集培养的目的并不是获得菌种鉴定结果，而是提高目标酵母菌的数量和检出机会，为后续平板分离提供充足菌源。

021100 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD) 250g/瓶

021120 麦芽汁培养基 250g/瓶

第二步：抑制部分细菌，提高酵母菌筛选效率

富集后的培养液通常并不是纯培养，其中仍可能同时存在细菌、霉菌和多种酵母菌。因此，需要进一步接种到适合酵母菌生长的固体培养基上，使不同微生物形成相互分离的菌落。

环凯021050 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA，添加氯霉素）用于霉菌和酵母菌的计数及分离培养。马铃薯浸出物和葡萄糖为真菌生长提供营养，而氯霉素能够抑制部分细菌生长，从而降低细菌对酵母菌和霉菌培养的干扰。

对于高糖、低水分活度样品中的酵母菌，则可根据筛选目的选择针对性更强的培养基。例如，环凯 021115 DG18琼脂可用于嗜渗酵母等真菌的选择性分离，在蜂蜜等高糖食品的酵母菌检测中具有较好的适用性。

因此，酵母菌筛选并不是培养基使用得越多越好，而应根据样品来源、目标酵母的生态特征以及筛选目的选择合适的分离培养基。

021050 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(添加氯霉素) 250g/瓶

021115 氯硝胺18%甘油(DG18)琼脂基础 250g/瓶

第三步：挑取单菌落，再进行纯化培养

分离平板出现菌落后，并不意味着已经获得纯酵母菌株。酵母菌菌落常表现为圆形、表面光滑、湿润或乳脂状，但不同酵母之间的菌落外观可能十分相似，部分细菌也可能形成类似菌落，因此不能仅凭肉眼观察直接判断菌种。应根据菌落的颜色、大小、表面状态、边缘及隆起程度等特征，从分离平板上挑取具有代表性的疑似酵母菌落，再进行划线纯化。

环凯021100 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD）可用于酵母菌培养。培养基中的胨提供氮源和其他营养物质，酵母浸出粉提供维生素及生长因子，葡萄糖作为主要能源，有利于酵母菌生长。因此，从分离培养基上获得疑似酵母菌落后，可转接至YPD琼脂进行划线培养。

如果培养后仍然出现两种或两种以上明显不同的菌落形态，则说明菌株可能存在混杂，需要继续进行：单菌落挑取 → 划线培养 → 菌落观察 → 再次挑取直至培养物的菌落形态基本一致，并结合显微观察确认其纯度后，再进入后续鉴别。

021100 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD) 250g/瓶

对于希望减少培养基制备步骤的实验室，环凯还提供 021100B YPD平板培养基，规格为 90 mm × 20个/盒，可直接用于酵母菌培养。

021100B YPD平板培养基(酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂) 90mm×20个

第四步：从“疑似酵母”进入鉴定阶段

纯化后的菌株仍然只能称为“酵母样菌株”，不能根据菌落外观直接确定种属。环凯官网中的02111 麦芽汁琼脂培养基明确用于“酵母菌的培养、鉴定及保存菌种”。培养基中的麦芽膏粉提供真菌生长所需的碳源和氮源，产品中含有氯霉素以抑制部分细菌生长。官网质控菌株包括白色念珠菌和酿酒酵母。对于念珠菌这一特定菌群，还可进一步使用显色培养基进行初步鉴别。环凯CRM010念珠菌显色培养基用于念珠菌，特别是白色念珠菌的选择性分离和初步鉴定。需要注意的是，培养基上的菌落形态和显色结果属于初步鉴别依据，并不能替代最终的菌种鉴定。对于需要获得种水平鉴定结果的酵母菌株，还应结合生理生化鉴定、质谱或分子生物学方法进一步确认，例如糖同化鉴定系统、MALDI-TOF MS或ITS序列分析等。

CRM010 念珠菌显色培养基 1000mL/瓶

结语：筛到菌落只是开始，得到纯菌株才是鉴定的基础

酵母菌筛选的关键并不在于培养皿上出现多少菌落，而在于能否从复杂微生物群落中获得具有代表性、纯度可靠的酵母菌株。

前期通过YPD液体培养基或麦芽汁培养基提高酵母菌的检出机会，再利用PDA、DG18等培养基进行分离筛选；获得疑似菌落后，通过YPD反复划线纯化，最后结合形态观察、显色培养以及进一步鉴定，可以建立较完整的“富集—分离—纯化—鉴别—确认”流程。培养基解决的是不同阶段的问题：富集是为了让目标菌长出来，分离是为了把不同微生物分开，纯化是为了获得单一菌株，而鉴定才是确定菌株身份。

只有前端的富集、分离和纯化足够可靠，后续获得的酵母菌鉴定结果才更值得信赖。